[发明专利]一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属唾液中检测酒精领域，特别是涉及一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法。

背景技术

酒精检测的社会应用已很广泛，而近年来，酒后引起的刑事案例和酒后驾车引起的交通事故案例不断上升。许多国家都制定了血液中酒精浓度与交通事故责任认定的关系，建立了多种能够检测血液中酒精含量的方法。但在实际中，取血样检测酒精含量，总有卫生安全隐患，因而更青睐于取唾液进行酒精检测。

目前，出现了很多便于携带的检测试剂条，如公开号为CN1837821A和CN1904619A，它们都利用了以下，原理：

ALO：酒精氧化酶

HRP：辣根过氧化物酶

TMB：3，3’5，5’-四甲基联苯胺

但对于高酒量人群，在酗酒以后，检测结果会出现反而降低的现象，因此在执行交通法规的检测时，作为处罚的依据反而难以执行。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，该方法能改善上述问题，清除测定高酒量人群中的抑制反应，使反应结果更准确。

本发明的一种检测唾液中酒精含量的试剂的制备方法，包括下列步骤：

(1)滤纸在第一相浸液中浸泡后，吸去过多的浸液，20-30℃迅速温热干燥，再在第二相浸液中浸泡，20-30℃再次干燥，得到测定试纸的原纸；

(2)用双面胶将上述测定试纸的原纸粘贴在塑料片上，切割成小块的测定试纸条。

所述的第一相浸液总体积为10mL的配制过程如下：

1)配pH7.2的0.1mol/L～2mol/L Tris-丙二酸缓冲液或pH7.8的0.5mol/L PB(磷酸盐缓冲液)；

2)溶入乙醇氧化酶，10mL缓冲液中含有10～200iu；

3)溶入辣根过氧化物酶，10mL缓冲液中含有200～5000iu；

4)溶入乙醛脱氢酶，10mL缓冲液中含有2～100iu，NAD⁺0.01-0.1g；

5)溶入稳定剂和保护剂，浓度0.1％～3％(g/100mL)。

所述的稳定剂和保护剂是天然或人工聚合高分子胶体，是明胶、阿拉伯胶、牛血清白蛋白、聚乙二醇、聚丙烯酸-丙烯酸酯中的一种或几种混合物。

所述的第二相浸液是采用3，3’5，5’-四甲基联苯胺显色剂，溶于有机溶剂，浓度为0.2％～1.5％(g/100mL)。

采用甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷或二甲基甲酰胺作为溶剂。

所述步骤(2)中的切割成小块的测定试纸条是切割成含有0.4×0.4～0.6×0.6cm的小块的测定试纸条。

本发明的原理：

ALO：酒精氧化酶

HRP：辣根过氧化物酶

TMB：3，3’5，5’-四甲基联苯胺

Aldehyde-DH：乙醛脱氢酶

NAD⁺：辅酶I

NADH：还原辅酶I

本发明的有益效果：

1)可以加速反应进程；

2)清除反应产物，有利于反应更完全；

3)当被测样品中含有较高浓度乙醇时，可减少反应物和反应产物的干扰；

4)有利于清除测定高酒量人群中的抑制反应，使反应结果更准确。

5)对于高酒量人群大酒量饮酒后产生的乙醛，通过酶催化显色反应进行测定。

附图说明

图1是本发明的制备流程图。图2是酒精测定试剂条。图3是酒精和酒精在体内代谢产物乙醛二项测定试剂条。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

1.配制第一相浸液

在pH7.2的0.2mol/L Tris-丙二酸缓冲液10mL中，溶解100iu的乙醇氧化酶，再加入辣根过氧化物酶2500iu，搅拌均匀，充分溶解后，再加入乙醛脱氢酶100iu、NAD⁺20mg、20mg明胶(预溶)。

2.以3号whatman定量分析试纸浸湿均匀，取出，吸去多余液体，在28℃下孵箱中吹干。

3.配制第二相浸液

称取TMB 100mg，用10mL二甲基甲酰胺溶解。