[发明专利]针对禽流感病毒的重组联合DNA疫苗

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种针对禽流感病毒的DNA联合重组疫苗。它同时利用HA和NP两种病毒蛋白而达到对于H5亚型禽流感病毒甚至更多禽流感病毒的抵抗，在防御禽流感方面具有非常重要的应用价值。

背景技术

禽流感(Avian Influenza，AI)是禽流行性感冒的简称，是由A型流感病毒(Avian influenza virus type A)引起的一种从呼吸系统到全身败血症等多种症状的急性高度致死性的传染病，被世界卫生组织(OIE)列为A类烈性传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。我国把它列为一类动物传染病。

流感病毒由特异的不具交叉反应的核糖核蛋白抗原区分为三个不同的抗原型，即A、B、C三型，禽流感病毒属于A型。A型流感病毒根据其表面蛋白——血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)分为若干亚型，目前已知的H亚型有15个，N亚型有9个。世界各地的禽流感主要由高致病性的H5和H7两种亚型引起，目前在越南、韩国和日本等地流行的禽流感病毒属H5N1型。

但随着人类感染禽流感病毒而发病的事例的出现，人们不得不意识到，高致病性禽流感病毒也有可能像SARS病毒一样，引起一场大范围传染性灾难。高致病性禽流感具有几个特点：高传播性，禽传禽的特点和候鸟的迁徙带来很大威胁，而禽传人的可能又存在着相当大的隐患；难预防，禽流感和普通流感的症状相差不多，初期很可能被忽视，可其致死率却大大高于普通流感；高变异性，禽流感病毒的高变异性使得治疗性药物和疫苗的研发面对相当大的挑战。

针对H5N1禽流感病毒，已经有一些实验室开展了研究工作，并且取得了一定的成绩。对于H5N1病毒的预防，疫苗是非常关键的一个手段。从国内爆发禽流感疫情以来，很多生物公司都研制出不同的疫苗来抵御禽流感病毒，比较有代表性的有H5N2禽流感灭活疫苗、H5/H9二价禽流感灭活疫苗、H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗和H5禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗等。从现有技术已开发的疫苗来看，大多是采用灭活方法得到的蛋白疫苗。但是这种疫苗的应用存在很多弊端，比如生产周期长，成本高，仅仅是利用鸡胚培养病毒再进行灭活的过程就要几个月时间，而且对于鸡胚等的消耗量非常大，得率却很低，并且对于储存条件的要求很高，这些都延长了周期和提高了生产成本。而且蛋白类疫苗也无法有效面对禽流感病毒的高变异性，不管是效果还是生产制作的时间都有弊端。

因此，本领域还需要开发对于防治禽流感更有效的疫苗，它不但可以降低生产成本，以最快的速度进行合成，并且可以在一定程度上解决新亚型病毒出现的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于防治禽流感的联合疫苗，其制备方法和用途。

在本发明的第一方面，提供一种重组载体，所述的重组载体含有：

(1)操作性相连的启动子1，H5N1流感病毒血凝素(HA)编码基因和终止子；和

(2)操作性相连的启动子2，H5N1流感病毒核蛋白(NP)编码基因和终止子。

在一个优选例中，所述的启动子1或启动子2选自：

EF-1α启动子，和/或CMV启动子；

且，所述的启动子1和启动子2相同或不同。

在另一优选例中，所述的启动子1是EF-1α启动子；所述的启动子2是CMV启动子。

在另一优选例中，所述的重组载体是pBudCE4.1。

在本发明的第二方面，提供一种基因工程化的细胞，所述的细胞含有所述的重组载体。

在另一优选例中，所述的细胞是真核细胞。

在另一优选例中，所述的细胞是HEK293T细胞。

在本发明的第三方面，提供所述的重组载体的用途，用于制备防治禽流感的组合物。

在另一优选例中，所述的组合物还用于提高动物体内的IFN-γ值。

在本发明的第四方面，提供一种防治禽流感的组合物，所述组合物含有：

有效量(0.00001-50wt％；较佳的0.0001-10wt％；更佳的0.01-1wt％，如0.1％)的所述重组载体；以及药学上可接受的载体。

在本发明的第五方面，提供一种防治禽流感的药盒，所述的药盒中含有所述的组合物，或所述的重组载体。

另一方面，还提供一种防治禽流感的方法，所述方法包括：给予需要防治的对象有效量的所述的重组载体。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明