[发明专利]一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，具体地涉及人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体确认试剂盒。

背景技术

获得性免疫缺陷综合症(AIDS Acquired Immunodeficiency Syndrome)是由人免疫缺损病毒(HIV，Human Immunodeficiency Virus)感染所引起的一种严重的传染性疾病。当前对HIV感染还没有安全有效的治疗方法.HIV极高的突变率等原因又使研制HIV有效疫苗极为困难，所以目前防治的主要手段还是以预防为主，普及HIV抗原抗体检测，以尽早发现HIV感染者，控制其传播。

艾滋病病毒(HIV)是单链RNA病毒，属于逆转录病毒(retrovirus)科，慢病毒(lentivirus)亚科。目前发现的导致人类感染的HIV-1型和HIV-2型两种亚型中，HIV-1的感染比较常见，世界各国的HIV感染的绝大多数都是由HIV-1引起的。HIV-2的感染仅在西非和其他少数的地区被发现。

如前所述，HIV感染的实验室检测在HIV感染的诊断、疾病进展的监测、抗病毒疗效观察和耐药监测中至关重要。目前临床检测内容包括HIV抗体、P24抗原、HIV病毒载量、CD₄⁺T淋巴细胞计数等。

上述临床检测内容中，HIV抗体检测是目前检测HIV最为主要、有效的检测方法。血清学检测例如ELISA方法已经证实对于检测病人血液中的HIV抗体十分敏感。但是，血清学检测的不足之处在于，此类试验中频繁出现的假阳性结果使得我们必须寻找一种特异性更加好的测定方法。HIV抗体检测不同于其他病原微生物的检测，任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者甚至他人产生十分重要的影响。

为了获得针对HIV特异性更好以及更容易推广的测定方法，研究人员在该领域进行了不断研究。目前随着分子生物学技术的迅速发展，HIV抗体检测方法也随之不断更新，从常规的抗体检测到现在的逆转录PCR实验(RT-PCR)，分支DNA杂交实验(bDNA)，核酸序列扩增实验(NASBA)，尽管新的测定方法不断推出，但这些方法在实际应用中存在灵敏度与特异性的问题，技术上的问题尚不能使这些新型检测试剂大规模应用于临床应用。

目前，世界卫生组织(WHO)和国家疾病预防控制中心(CDC)建议使用HIVWestern Blot试验来重复检测经由ELISA或者其他血清学试验方法发现为阳性的标本，作为HIV检测的最终判断，以尽可能的避免假阳性结果的出现。

在实践中，HIV抗体检测方法由初筛试验和确认试验组成。初筛试验结果阳性者再做确证试验以明确诊断。目前国内的HIV抗体检测使用的试剂，要求能同时检测HIV1型和HIV2型。初筛检测的方法有间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)和金标法(SPOT)，其中最常用的方法为酶联免疫吸附试验。HIV抗体筛查试剂敏感性较高，存在潜在的非特异性反应，有假阳性的可能，因此确认试验在HIV检测的最终判别中尤为重要。确认试验的方法包括免疫印迹试验、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验及免疫荧光试验，目前以免疫印迹试验最为常用。

总之，由酶联免疫吸附检测(ELISA)联合免疫印迹检测(WB)组合而成的抗体检测至今还是公认的HIV检测的“金标准”方法。也就是说，目前对人类免疫缺陷病毒(以下简称为HIV)抗体进行筛查的整个流程主要是：应用HIV抗体酶联免疫试剂盒，然后对检测为阳性的样品需要进行HIV抗体确认检测，一般采用HIV抗体确认试剂。因此HIV抗体确认试剂在HIV的诊断中尤为重要。

由于HIV抗体确认试剂的技术含量较HIV初筛试剂的含量高，目前，HIV抗体确认试剂在我国完成注册仅有两家，其中包括美国MP公司在新加坡生产的HIVBlot2.2试剂和杭州澳亚公司的人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2抗体确认试剂盒。国内每年HIV确认试剂用量大约在十万人份，由于进口试剂的特异性较国内生产的试剂相对稳定，进口试剂在我国市场占有率达95％以上。但是进口试剂的缺点在于成本较高，检测过程时间较长。

而国内生产试剂的主要缺点在于稳定性、特异性相对于进口试剂有所欠缺。

在现有技术中，文献报道叠氮钠和硫柳汞可作为防腐剂使用。但是，通常的观点是，叠氮钠和硫柳汞用于纯的HIV抗体质控血清时，对血清的稳定性没有影响。