[发明专利]扩增抗体重链前导序列及可变区基因序列的方法及其引物

权利要求书

1.一种获得单克隆抗体重链基因的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)以SEQ ID NO：1所示序列为引物，以杂交瘤细胞的RNA为模板，进行反转录，获得cDNA；

(2)在反转录获得的cDNA的3’末端加上多聚N，获得加尾产物；其中N是选自A、T、C或G之一的碱基，N的个数是5-120个；

(3)以SEQ ID NO：2所示序列和多聚M为引物，以加尾产物为模板，进行PCR扩增，获得扩增产物；其中M是选自A、T、C或G之一且与N互补配对的碱基，M的个数是10-40个；和

(4)从扩增产物中分离获得单克隆抗体重链基因。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，N是选自C或G的碱基。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，PCR扩增的热循环过程中，退火温度是60-65℃。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤：对获得的抗体重链基因进行测序，从而获得单克隆抗体重链基因的序列。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的单克隆抗体是：IgG1，IgG2a或IgG2b型。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的单克隆抗体重链基因包括抗体重链的前导序列和可变区基因。

7.一种用于扩增单克隆抗体重链基因的引物，其特征在于，所述的引物具有选自下组的序列：SEQ ID NO：1所示的序列，或SEQ ID NO：2所示的序列。

8.一种扩增单克隆抗体重链基因的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有引物，所述的引物具有SEQ ID NO：1所示的序列和SEQ ID NO：2所示的序列。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有：同聚物加尾试剂，用于在反转录产物中cDNA的3’末端加上多聚N，获得加尾产物；其中N是选自A、T、C或G之一的碱基，N的个数是5-120个；和/或

多聚M引物，M是选自A、T、C或G之一且与N互补配对的碱基，M的个数是10-40个。

10.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有：

PCR扩增试剂；和/或

RNA提取试剂；和/或

使用说明书。