[发明专利]XAGE－1基因及其表达产物在肿瘤治疗和诊断中的应用

说明书

技术领域

本发明属于基因治疗和诊断技术领域，具体涉及一种新的肿瘤抗原——XAGE-1及其表达产物在肿瘤治疗和诊断中的应用。

背景技术

肿瘤-睾丸抗原(CT抗原)是一类主要表达于正常的种系生殖组织(特别是免疫赦免的睾丸组织)与癌变组织，在其他正常组织中完全不表达或仅有少量表达的肿瘤抗原，一些著名的肿瘤抗原，如MAGE，BAGE，GAGE等均属于CT抗原。CT抗原这种精确的限制性分布使其成为了当前肿瘤免疫治疗研究中的热点。XAGE/CT12是利用生物信息学方法发现的一类新基因，包括XAGE-1，XAGE-2和XAGE-3。其中，XAGE-2与XAGE-3的肿瘤表达谱很窄，研究也很少，XAGE-1除了在正常的睾丸组织中表达外，在前列腺癌、黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、涎腺腺样囊性癌等多种肿瘤组织中均有较高的检出率。XAGE-1有4种表达亚型：XAGE-1a，XAGE-1b，XAGE-1c和XAGE-1d，主要表达亚型是XAGE-1b。目前XAGE-1的功能尚未见报道，本文以XAGE-1b为例首次阐述了XAGE-1的功能及其应用价值。

涎腺腺样囊性癌(ACC)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤，较易发生远地尤其是肺转移。ACC-2是涎腺腺样囊性癌细胞系，ACC-M是经裸鼠体内连续传代培养，从低转移细胞系ACC-2中分离出的高转移细胞系。涎腺腺样囊性癌高低转移细胞系基因表达谱差异性研究发现：高转移细胞系中XAGE-1b呈高表达状态。

利用基因工程方法，应用真核表达质粒与腺病毒表达系统介导基因过表达及RNA干扰是研究基因功能的有效方法。将XAGE-1b cDNA序列构建到真核表达载体上，同时构建该基因的腺病毒表达载体，利用载体介导该基因在ACC细胞或其他细胞中的过表达，通过细胞增殖、克隆形成、体外穿膜、软琼脂集落形成、裸鼠皮下成瘤及尾静脉注射肺部成瘤实验就可以研究该基因在肿瘤细胞增殖、浸润、转移中的作用；以真核质粒或腺病毒载体系统介导靶向XAGE-1b表达的RNA干扰，利用细胞及裸鼠模型实验同样可以研究该基因的功能及其在肿瘤治疗上的应用。

针对肝癌，临床上迫切需要解决的问题是寻找既敏感又特异的诊断指标。目前首选指标是甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)，但其特异性及敏感性均有许多不足。采用Taq-Man荧光定量PCR方法，分析一定数量肝细胞癌患者及部分健康志愿者血液样本中XAGE-1b的表达水平及其与AFP的相关性，从而可以探讨XAGE-1作为肿瘤分子诊断标识的可行性。

另外，扩增XAGE-1a，1b两种转录本的转录起始点上游序列，分别构建入报告基因载体，采用双荧光素酶报告系统可以研究比较各片段的转录活性，可以推测XAGE-1基因核心启动子和其它一些调控元件所在区域，从而可以探讨XAGE-1基因调控序列在肿瘤治疗等方面的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的肿瘤治疗药物靶点和诊断标志物，该靶点或标志物是肿瘤抗原基因XAGE-1(包括XAGE-1a，XAGE-1b，XAGE-1c和XAGE-1d)及其表达产物。

本发明还提供基于XAGE-1及其表达产物的应用。

本发明的目的是这样实现的：

1.XAGE-1对肿瘤细胞体外增殖能力的影响：分别将表达及干扰XAGE-1b的稳定细胞株ACC2-Xb-19与ACCM-pG-Sh-a接种于96孔板，1×10⁴细胞/孔，分别在之后的24h、48h、72h、96h，利用MTT法检测细胞数量，结果发现：ACC2-Xb-19与ACC2-Xb-M组细胞增殖能力显著强于对照组细胞，ACCM-pG-Sh-a细胞增殖能力显著弱于对照组细胞；分别将ACC-2与ACC-M细胞接种于96孔板，3×10³细胞/孔，10h后感染Adv-1b，在此之后每隔12h利用MTT法检测一次细胞数量，共6次，结果发现：感染Adv-1b后的细胞增殖能力显著强于对照组细胞；分别将ACC2-Xb-19与ACCM-pG-Sh-a细胞接种于6孔板，500细胞/孔，14d后结晶紫染色观察记录：ACC2-Xb-19组形成的集落数量显著多于对照组，ACCM-pG-Sh-a组形成的集落数量显著少于对照组；分别将感染病毒后的ACC-2与ACC-M细胞接种于6孔板，500细胞/孔，10d后结晶紫染色观察记录：Adv-1b感染后的细胞形成的细胞单克隆集落要显著大于对照组。上述结果说明：XAGE-1可以显著地促进ACC-2及ACC-M细胞的体外增殖能力。