[发明专利]一种与帕金森病相关的果蝇源蛋白CG2233及其应用

说明书

技术领域

本专利涉及一种与帕金森病相关的果蝇源蛋白CG2233及其应用。

发明背景

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的老年性进行性神经系统变性疾病，在60岁以上人群中的发病率为1-2％。临床症状为静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓、平衡失调或震颤等，在病理学上主要表现为黑质致密部的多巴胺能神经元损失和Lewy小体聚集物的形成，到目前为止没有很好的治疗方法，只能针对性的用药如左旋多巴等来缓解症状。

果蝇已成为研究诸如帕金森病之类的神经系统变性疾病的一种重要模式生物。利用UAS/GAL4系统，已经能够较为容易的实现基因的异位表达从而构建果蝇的帕金森病模型。蛋白质组学以及生物信息学的迅速发展，双向电泳之类的高新技术手段在实验室中运用，给予了我们从一个整体的，蛋白的角度研究帕金森病分子发病机制的良好平台。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种与帕金森病相关蛋白CG223。

本发明的目的之二在于提供了与帕金森病相关蛋白CG223在内质网到高尔基体囊泡介导的蛋白转运中的应用。

本发明的目的之三在于提供了与帕金森病相关蛋白CG223在细胞内的蛋白转运中的应用。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种与帕金森病相关的果蝇源蛋白CG2233。

一种上述与帕金森病相关的果蝇源蛋白CG2233在内质网到高尔基体囊泡介导的蛋白转运中的应用。

一种上述与帕金森病相关的果蝇源蛋白CG2233在细胞内的蛋白转运中的应用。

我们通过在果蝇脑部特异性人源alpha-synclein A53T，构建了确为可靠的果蝇帕金森病模型。然后通过脑部全蛋白双向电泳及质谱鉴定，找出了发病组和对照组果蝇脑部的差异表达蛋白。为了更好的研究这些蛋白之间的关系，我们使用了生物信息学的手段分别构成了人源和果蝇源这些蛋白质相互作用网络，从而更透彻的了解了PD发病的分子机制。

附图说明

图1为果蝇PD模型二维电泳图，图中标示出点所有差异点，其中C297，C342，C389为与帕金森病相关的果蝇源蛋白CG2233的3种异构体。

图2为与帕金森病相关的果蝇源蛋白CG2233的质谱分析报告。

图3为果蝇帕金森病相关蛋白网络图，图中正方形表示的点为质谱测试所得的差异蛋白点，左下角三角形表示的蛋白点为CG2233。

图4为人类帕金森病相关蛋白网络图，图中正方形表示的点为质谱测试所得的差异蛋白点，右下角八边形表示的蛋白点为人类α-synuclein，左下角三角形表示的蛋白点为CG2233在人类中的功能对应点O95487。

具体实施方式

实施例一：果蝇帕金森病模型与对照组的蛋白质组学分析发现了蛋白CG22331.果蝇帕金森病模型的构建：α-synuclein A53T基因的在果蝇脑部异位表达可以利用在UAS/GAL4系统来实现。将UAS-syn A53T品系果蝇与TH-GAL4品系果蝇进行杂交，收集F1代，构建了果蝇α-synuclein A53T帕金森病模型。通过基因组PCR，realtimePCR，脑部免疫组化，以及行为学试验(CounterCurrent Assay)，我们验证了此模型确实导致了果蝇脑部PPM1/2区域的多巴胺能神经元特异性降解，并且导致果蝇爬壁能力的降低。而多巴胺能神经元特异性降解以及运动障碍正是人类帕金森病的重要特点。

2.双向电泳及质谱分析：我们采用了蛋白组学的研究手段对果蝇脑部全蛋白进行分析。实验分为2组：表达α-synuclein A53T的果蝇(羽化后19天)与CantonS果蝇(羽化后19天)，每组3个重复。上样蛋白量为每块胶40mg。

(1)采用ph3-10NL(24cm)胶条进行第一项等电聚焦，其运行参数设置为：

第一步Stp 100V  11:00hr(水化)

第二步Stp 500V  1:00hr(等电聚焦)

第三步Grd 1000V 1:00hr(等电聚焦)

第四步Grd 8000V 3:00hr(等电聚焦)

第五步Stp 8000V 36000Vhr(等电聚焦)

第六步Stp 500V  24hr(低电场维持)

(2)胶条进行平衡，其流程为：DTT平衡，碘乙酰胺平衡以及IPG胶条的转移。

(3)进行单一浓度12.5％SDS-PAGE垂直电泳，电泳参数设定为：

温度：25℃