[发明专利]抗H5N1来源的禽流感病毒核蛋白NP的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，更具体的，本发明涉及抗H5N1来源的禽流感病毒核蛋白NP的单克隆抗体及其应用。

背景技术

流感一般具有高致病性，高传染性，传播迅速，死亡率高的特点，对它的诊断主要针对禽类和人类。一般都有临床、流行病学诊断、病理学与病原学诊断、血清学诊断与其他检测技术。禽流感的床症状因感染禽的种类、年龄、并发感染情况及新感染毒株的毒力等不同而表现不一致。其病理变化因感染病毒株毒力的高低、病程的长短及种类也不尽相同，而且无特征性性状和剖检变化。所以，流感的诊断一直依赖于病原的分离鉴定和血清学诊断。这些诊断方法局限于实验室诊断，有如下缺点：(1)操作危险，容易发生污染和感染，只能在专业实验室由专业人员来操作；(2)耗时长，工序多，一般都需要10小时以上；(3)仪器繁杂，成本高，而且需要专业人员才能分析结果和数据并作出诊断报告；这对疾病的诊断和病例的筛出极为不便。尤其当大规模的A型流感爆发之际，需要对易感人群和禽类进行大规模筛查，需要快速有效的得到结果，以上方法耗时长，方法复杂又存在地域局限，很不利于疾病的大规模筛查和诊断。

根据病毒抗原特性及其基因特性的不同，流感病毒分为甲、乙、丙三型(即A，B，C型)。甲型抗原变异性最强，感染人类和其他动物，引起中、重度疾病，侵袭所有年龄组人群，常引起世界性大流行。乙型变异性较弱，仅感染人类，一般引起轻微的疾病，主要侵袭儿童，可引起局部爆发。丙型抗原性比较稳定，仅引起婴幼儿感染和成人散发病例。

甲型流感病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，H可分为15个亚型(H1～H15)，N有9个亚型(N1～N9)。其中仅H1N1、H2N2、H3N2主要感染人类，其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。所以本领域通常所称禽流感属于甲型流感。其中对禽类危害最大的为H5、H7和H9亚型毒株。一般情 况下，禽流感病毒不会感染鸟类和猪以外的动物。但1997年香港首次报道发生18例H5N1人禽流感感染病例，其中6例死亡，引起全球广泛关注。1997年以后，世界上又先后几次发生了禽流感病毒感染人的事件。具有高致病性的H5N1、H7N7、H9N2、等禽流感病毒，一旦发生变异而具有人与人的传播能力，会导致人间禽流感流行，预示着禽流感病毒对人类已具有很大的潜在威胁。

禽流感病毒为球形约为100nm，RNA型，由三部分组成，其核心部分由单链负RNA和包于其外的核蛋白(NP)组成。其病毒RNA片段5长约115Kb，编码病毒核衣壳蛋白(NP)，它是一种单体磷酸化的多肽，是构成病毒核衣壳的主要蛋白成分，与基因组RNA一起构成核酸核蛋白体(RNP)，然后与RNA聚合酶共同构成病毒的核心成分。NP蛋白具有型特异性，是流感病毒划分A、B、C型的主要依据，同时，在病毒基因组的转录和复制以及决定宿主特异性方面都有重要作用。由于NP是细胞毒性T淋巴细胞识别的主要抗原，所以人们一直期望它所诱导的免疫保护性能给动物提供保护，然而NP的单克隆抗体却不能给动物提供被动保护，并且用体外合成的NP来免疫动物时，也只能产生较微弱的保护能力。AIV核蛋白(NP)为构成病毒核衣壳的主要蛋白成分，其结构高度保守、变异率很低、具有群和型的特异性，是流感病毒型分类和诊断的基础，也是禽流感病毒(A型流感)诊断的重要依据。

由于禽流感(A型)的爆发会构成对人类健康的巨大威胁，也会引起养殖业和农业的巨大损失，因此一旦出现流感感染事件就会在社会上引起人们的巨大恐慌。但流感当中相当一部分属于B型和C型，真正的A型流感只占少数。因此为了更加准确及时的对流感进行诊断，对维护人类健康和社会稳定意义重大。目前市场上仅有少数产品能特异性的诊断区分A，B，C型，其质量和稳定性均不太可靠。对于流感这种爆发率高，死亡率高的疾病，准确有效的诊断产品有巨大的市场需求。

因此，本领域有必要通过筛选获得识别效果良好的禽流感病毒NP蛋白特异性单克隆抗体，以更准确地鉴定禽流感病毒，为临床诊断、治疗争取时间。

发明内容

本发明的目的在于提供一类特异性抗禽流感病毒核蛋白(NP)的单克隆抗体。

本发明的另一目的在于提供特异性抗禽流感病毒的检测试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种特异性抗禽流感病毒核蛋白(NP)的单克隆抗体，所述的单克隆抗体由选自下组的杂交瘤细胞株产生：

保藏号为CCTCC-C200812的杂交瘤细胞株(S-200-23)；

保藏号为CCTCC-C200811的杂交瘤细胞株(S-171-9)；或