[发明专利]糖尿病遗传检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测个体糖尿病遗传易感性的试剂盒，通过同时检测与糖尿病密切相关的脂联素基因(ADIPOQ)、白介素6基因(IL-6)、脂蛋白脂酶基因(LPL)、维生素D受体基因(VDR)上的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体糖尿病遗传易感性。

背景技术

糖尿病是由于胰岛素分泌不足或相对不足以及发生胰岛素抵抗，引起糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱的疾病。临床以高血糖为主要标志，通常表现为“三多一少”，即多食、多尿、多饮、体重减轻。病情严重时可发生急性代谢紊乱如酮症酸中毒等。

糖尿病虽不直接致命，但久病可引起多个系统损害。常见并发症有肺结核、化脓性皮肤病、高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、肾病、白内障、眼底视网膜病变及神经病变，许多并发症不仅会严重影响生活质量，还有较高的致死率。目前我国糖尿病爆发性流行的形势十分严峻，由于大众生活水平的提高，很多人不注意保持良好生活习惯，饮食无度，使得近年来糖尿病发病率迅速攀升。据人民日报报道，我国糖尿病发病率约5％，患者人数居世界第二位。

ADIPOQ基因主要在脂肪组织中表达，编码一种在结构上与胶原X和VIII以及补体Clq类似的蛋白质，进入血液循环。当携带风险基因型时，ADIPOQ基因表达量可能会降低，引起血浆脂联素浓度偏低，脂肪酸氧化减少，影响机体的胰岛素敏感性。同时，骨骼肌胰岛素受体酪氨酸磷酸化作用减弱，易导致全身胰岛素敏感性下降，产生胰岛素抵抗，使糖尿病的风险增加。

IL-6基因编码的白介素6是细胞因子家族中的成员，作为一种前炎性细胞因子，它可由多种细胞产生，基础状态下血浆中IL-6水平主要来自脂肪组织分泌，作为一种自分泌、旁分泌和内分泌激素刺激肝细胞生成多种急性时相的蛋白质调节机体免疫，参与体内的脂肪、葡萄糖等能量代谢，诱导胰岛素抵抗，破坏β胰岛细胞，在糖尿病发生发展中起着重要作用。因此，当IL-6过量表达时，会引起胰岛素抵抗，从而诱发糖尿病。当携带风险基因型时，白细胞介素6表达增加，影响脂肪代谢，干扰胰岛素信号传导系统，降低胰岛素敏感性，引起胰岛素抵抗，导致糖尿病发生风险增加。

LPL基因主要在心脏、肌肉和脂肪组织中表达，其编码的脂蛋白脂酶能够催化极低密度脂蛋白或者低密度脂蛋白的水解，参与脂质代谢的通路。该基因的变异在严重的情况下可以导致I型高脂蛋白血症，而较轻程度下则引起体内脂蛋白代谢紊乱，从而干扰胰岛素的作用，引发糖尿病。当携带风险基因型时，脂蛋白脂酶活性偏低，血脂整体升高，乳糜微粒和极低密度脂蛋白水平升高，低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平降低，易引起体内脂蛋白代谢紊乱，从而诱发糖尿病。

VDR编码维生素D3的核激素受体，不仅分布在肠、骨、肾，还分布于甲状旁腺、胰岛细胞、造血干细胞、活化的淋巴细胞等。该蛋白与维生素D结合，对基因表达进行调节，主要通过一系列代谢反应通路，包括免疫反应和肿瘤激活通路，具有调控维生素D生理活性的作用。该基因的突变会导致维生素D活性的下降，减弱细胞免疫应答能力，削弱胰岛β细胞的再生和修复能力，使胰岛素分泌下降，诱发糖尿病。当出现风险基因型时，维生素D的活性作用降低，对胰岛β细胞的保护作用降低，胰岛素分泌量下降，易引发糖尿病。

发明内容

基于脂联素基因(ADIPOQ)、白介素6基因(IL-6)、脂蛋白脂酶基因(LPL)、维生素D受体基因(VDR)上的4个SNP位点多态性可用来评估个体糖尿病遗传易感性的基础上，本发明提供一种检测个体糖尿病遗传易感性的试剂盒。

该试剂盒包括：

检测ADIPOQ基因上Gly15Gly SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

检测IL-6基因上G-572C SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

检测LPL基因上PvuII SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

检测VDR基因上FokI SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

荧光定量PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、反应缓冲液、去离子水等)。

本试剂盒中所述的引物对是本领域技术人员能够轻易完成设计的，并可用常规的合成技术进行合成。

本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是本领域技术人员能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

10X荧光定量PCR反应缓冲液4μl，

25mM dNTP混合液0.4μl，