[发明专利]两种夹竹桃寡糖及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及糖类及其在制备药物中的应用，具体涉及两种夹竹桃寡糖及其制备方法和用途。

背景技术

糖是构成生命体的三大基本要素，在诸多生命过程中起到重要的作用。除了成熟的抗凝血药物肝素、治疗糖尿病的阿卡波糖等之外，现处于第I-III期临床试验的糖类药物共有34种。糖类药物的最大特点是低毒或无毒，因此其具有巨大的应用前景。

源于夹竹桃花的多糖具有抗肿瘤、抗氧化、免疫促进和神经保护作用。但是，遇到的问题是：这些大分子如果采用口服给药，其生物药效率将是非常低的。寡糖具有各种生物活性，是一种较新的功能性产物，被用于保健食品和药物中。例如，新的抗血管生成试剂PI-88就是一种高度硫酸化的寡糖，现处于第III期临床阶段。因此，寻找具有高活性的寡糖是一项很有意义的工作。我们试验发现，两种源于夹竹桃花的寡糖，具有显著的抗血管生成作用。

发明内容

为此，本发明一个目的是提供两种具有抗血管生成作用的夹竹桃寡糖，其化学结构式分别为：

β-D-Galp-(1→[4)β-D-Galp(1→]₈4)-β-D-Galp

↑

^*Galp

JZTOA-1和

β-D-Galp-(1→[4)β-D-Galp(1→]24)-β-D-Galp

↑

^*Galp

JZTOA-2

其中，^*Galp为具有还原末端的半乳糖，所述夹竹桃寡糖的分子量分别为1800Da和828Da。

本发明的另一目的是提供本发明的夹竹桃寡糖的制备方法，该方法是首先从夹竹桃花中提取多糖，再经水解、分离、纯化而制得所述夹竹桃寡糖的。

本发明的又一目的是提供本发明的夹竹桃寡糖在制备抗肿瘤药物中的用途。

本发明提供的夹竹桃寡糖的制备方法包括以下步骤：

a.多糖提取：干燥的夹竹桃花经乙醇脱脂，风干，加入去离子水，加热条件下提取，过滤，残渣再次用去离子水提取，如此反复提取2-6次，滤液合并，加热浓缩，浓缩液经15％三氯乙酸在4℃下脱蛋白，离心，上清液经中和，透析，再浓缩，加入3倍于浓缩液体积的乙醇，离心得沉淀，沉淀经真空干燥得水提夹竹桃粗多糖JZTP；

b.多糖水解：向水提夹竹桃粗多糖JZTP中加入酸，如三氟乙酸，在100℃条件下水解4小时，反应完毕后加入甲醇，减压浓缩，蒸馏水溶解，再加入乙醇，离心除去沉淀，上清液经减压浓缩得夹竹桃粗寡糖JZTO；

c.寡糖分离：将夹竹桃粗寡糖JZTO用水溶解、离心，用DEAE-纤维素(Cl-型)为载体进行柱层析初步分离，以蒸馏水洗脱，硫酸-苯酚检测，洗脱液再次浓缩、冷冻干燥、溶解和离心，上清液用1∶1(质量比)的活性炭与硅藻土为载体进行柱层析分离，逐步以蒸馏水以及有机溶剂与水的混合液，如5％乙醇溶液，50％乙醇溶液依次洗脱，其中50％乙醇洗脱液经浓缩以及冷冻干燥得到中性夹竹桃粗寡糖JZTOA；和

d.寡糖纯化：取中性夹竹桃粗寡糖JZTOA，水溶解，离心，上清液通过SephadexG-25柱进行分离，以蒸馏水洗脱，硫酸-苯酚检测，收取合并洗脱液，如此反复分离得到夹竹桃寡糖纯产物JZTOA-1；

取中性夹竹桃粗寡糖JZTOA，水溶解，离心，上清液通过Bio-GelP-2柱进行分离，以蒸馏水洗脱，硫酸-苯酚检测，收取合并洗脱液，如此反复分离得到夹竹桃寡糖纯产物JZTOA-2。

两种寡糖纯产物JZTOA-1和JZTOA-2经ESI-MS分析表明其分子量分别为1800Da和828Da。将其进行糖组成分析，即将寡糖完全水解、还原、乙酰化、萃取、浓缩后送入GC分析。糖组成分析结果显示，这两种寡糖为半乳寡聚糖。然后用碘甲烷进行反应至寡糖完全甲基化，再完全酸水解、还原、乙酰化、萃取、浓缩后用GC-MS分析。结合核磁共振分析(参见图1和2)和甲基化结果，确定这两种寡糖是以β(1→4)连接的直链半乳糖。

本发明通过以下附图和实施例作进一步阐述，但并不限制本发明的内容。

附图说明：

图1为夹竹桃寡糖JZTOA-1的¹³C NMR谱图；

图2为夹竹桃寡糖JZTOA-2的¹³C NMR谱图；