[发明专利]日本血吸虫重组多表位抗原及其表达、纯化方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物基因，具体涉及日本血吸虫重组多表位抗原及其表达、纯化方法 与在制备日本血吸虫病免疫预防疫苗和诊断试剂中的应用。

背景技术

日本血吸虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病。由于中间宿主钉螺难以消灭及血 吸虫重复感染现象严重，单靠药物治疗不能控制血吸虫病流行和最终消灭血吸虫病， 因此抗血吸虫病疫苗研究已经成为血防科研工作的重点之一。至今已有上百个血吸虫 抗原基因被克隆和鉴定，不少于30种血吸虫基因重组抗原疫苗和核酸疫苗用于动物 免疫保护试验，一些基因工程苗也取得了一定的保护效果。但由于血吸虫虫体大，抗 原性复杂，单一抗原诱导的保护效果不够理想。

表位(epitope)又称抗原决定簇，是指决定某抗原物质抗原特异性的化学基团。 T细胞和B细胞表面均存在特异性抗原受体，能识别相应的抗原表位，根据表位设计 疫苗，包括合成肽疫苗、多价基因工程疫苗及表位核酸疫苗，是疫苗设计的一种新途 径。抗原的加工就是天然蛋白质抗原在细胞内经过蛋白酶水解，转变成和组织相容性 复合物(MHC)分子相结合的肽段的过程，加工后的抗原被转送至细胞表面以抗原肽 -MHC相结合的形式进入三元体被免疫细胞识别，被称为抗原呈递。依照抗原加工呈 递原理可以人工预测、筛选抗原表位，而且研究人员已经根据此原理设计了计算机应 用程序和数据库来预测抗原加工呈递过程并进行抗原表位筛选，构建多表位基因工程 抗原疫苗或核酸疫苗，期望其可增强单一抗原的免疫原性，并诱导更高的免疫保护效 果。表位是疫苗设计和免疫识别的基础，因此，加强日本血吸虫抗原表位研究，利用 重组多表位抗原进行联合免疫或设计含多个表位的基因工程重组抗原疫苗或核酸疫 苗，是一条值得探索的提高疫苗保护力的途径。

日本血吸虫病诊断方法主要有病原诊断和免疫诊断两种。牛、羊等大家畜的病原 诊断方法目前应用较多的是尼龙筛淘洗集卵结合粪便毛蚴孵化法，该法结果可靠，但 检出率低、花费的时间较长。现有的家畜血吸虫病血清学诊断方法的应用提高了诊断 方法的敏感性，但特异性、重复性等还不够稳定。应用现代生物技术，寻找更为理想 的诊断抗原，对提高血清学诊断方法的敏感性、特异性将有很大的帮助。

本发明应用生物信息学方法和基因工程技术研制的重组多价核酸疫苗 pCMV-BSjGCP-BSj23、pCMV-BSjGCP-BSj23-BSj28和重组多表位抗原 pGEX-BSjGCP-BSj23、pGEX-BSjGCP-BSj23-BSj28在小鼠免疫实验中获得了较好的免 疫保护效果，重组多表位抗原在牛日本血吸虫病诊断中具有较高的敏感性和特异性， 表明该种多表位重组抗原和核酸疫苗的研制方法及其产物具有较高的应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于研究设计日本血吸虫重组多表位抗原的表达和 纯化以及在制备日本血吸虫病免疫预防疫苗和诊断试剂中的应用。

本发明提供了一种日本血吸虫重组多表位抗原。

所述日本血吸虫重组多表位抗原编码核苷酸片段具有如下核酸序列和相应的蛋白序 列：

1)BSjGCP-BSj23核酸序列：(见序列表SEQ ID 4)

atgcgaattg gatatgaggg tctaccacgt gatcaatggc caaaagtgat tcattggaat     60

ctacatgcac gtgacggtat tatctgggta ttagatggtc tattgaaatg tccggaaaaa    120

ctttgcccat tacttgctga agatgttgat tattattcta gaatgactgg tgctctggaa    180

aatccaaacg aggaaataac ggcaaccatg gataagatac aaacgtcatt ccattgttgt    240

ggagtcaaag gtccagacga ttataaaggg aatgtgccag catcatgtaa agaagggcaa    300

gaagtttatg ttcagggttg tctatctgtc tttagtgcat tcttgaaacg caac          354

BSjGCP-BSj23蛋白序列：(见序列表SEQ ID 9)