[发明专利]呋喃妥因代谢物检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及呋喃妥因代谢物检测试剂盒。

背景技术

硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗生素，它有非常好的抗菌作用和药动力学的特性，曾经被广泛应用作为家畜、家禽、人工养殖水产品的促生长添加剂。但通过长期的实验室研究发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，并由此推断，人类长期使用该类药物或长期食用添加该类促生长剂的家畜、家禽、人工养殖水产品，同样也可发生癌变和基因突变。所以此类药物禁止在治疗和饲料中使用。

我国于2002年颁布了禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令，在农业部发布的193号公告的《食品动物禁用兽药及其他化合物清单》中，硝基呋喃类抗生素在所有食品动物和所有用途中都被禁止使用。

欧盟委员会于2003年通过了2003/181/EC委员会决议，建立了用于检测禽肉产品和水产品中硝基呋喃类药物的代谢物的各种方法的最小要求性能限值(Minimum Required Performance Limits，MRPL)为1μg/kg，欧盟从第三国进口的动物性产品中硝基呋喃类药物的代谢物的含量不得超过1μg/kg。2004年美国FDA公布了禁止在进口动物源性食品中使用的11种药物名单，其中包括呋喃妥因。因此，为确保动物源性食品的安全和对外出口贸易的发展，建立准确可靠，灵敏度高的定性定量方法是十分必要的。

由于呋喃妥因在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物(AHD)则能存留较长的一段时间，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，检测监管部门就以检测代谢产物为手段达到检测呋喃妥因残留的目的。

国内外现已开发出检测呋喃妥因的酶联免疫试剂盒，但是现在国内大部分需求是从国外进口的，国内生产的试剂盒在准确性、灵敏度、特异性等方面还不能优于进口试剂盒。

发明内容

为了克服现有技术中存在的上述缺陷。

本发明提供一种检测呋喃妥因代谢物(AHD)的酶联免疫试剂盒，包括有：包被呋喃妥因代谢物衍生物抗原的酶联板与酶标记呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体或包被呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体的酶联板与酶标记呋喃妥因代谢物衍生物抗原；所述呋喃妥因代谢物衍生物抗原是采用活性酯法将呋喃妥因代谢物衍生物半抗原与载体蛋白进行偶联得到的。

上述载体蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、兔血清蛋白、人血清白蛋白、人血纤维蛋白或血蓝蛋白。

上述酶联板是以聚苯乙烯、纤维素、聚丙烯酰胺、聚乙烯、聚丙烯、交联葡聚糖、玻璃、硅橡胶或琼脂糖凝胶为载体，用pH值9.6、0.05mol/L、含有0.5％甲醇的碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，含有8％-15％的脱脂奶和1％惰性蛋白的溶液作为封闭液制备而成的。

上述酶联板的制备方法如下：

(1)用包被缓冲液将呋喃妥因代谢物衍生物半抗原与载体蛋白偶联物或抗抗体以0.02-0.08μg/ml浓度稀释成抗原稀释液或抗体稀释液；

(2)向酶联板的每孔中加入100μl已经稀释好的抗原稀释液或抗抗体稀释液，37℃温育2h，倾去包被液，用洗涤液洗涤4次，每次15-30s，去除水分；

(3)向酶联板的每孔中加入150-200μl封闭液，37℃温育1-2h，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封保存。

作为优化，上述酶为过氧化物酶或半乳糖甘酶，优选为过氧化物酶。

上述酶标记呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体是采用戊二醛法进行偶联制得。

上述酶标记抗原是采用活性酯法将标记酶与呋喃妥因代谢物半抗原进行偶联得到。

上述呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体为鼠源单克隆抗体或兔源多克隆抗体。

作为优化，上述试剂盒还包含呋喃妥因代谢物衍生物标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液和浓缩复溶液。

本发明提供的试剂盒内生产的试剂盒使用方便，而且在准确性、灵敏度、特异性等方面均性能良好。

具体实施方式

本发明的检测原理：当包被原为呋喃妥因代谢物衍生物偶联抗原时是将呋喃妥因代谢物衍生物半抗原与牛丙种球蛋白偶联物(AHD-BGG)吸附于固相载体上，加入样本或呋喃妥因代谢物衍生物标准品，然后加酶标记呋喃妥因代谢物特异性抗体，待测样品中残留的呋喃妥因代谢物(经前处理衍生化以后)和酶标板上包被的呋喃妥因代谢物衍生物抗原竞争酶标记呋喃妥因代谢物衍生物特异性抗体。显色后终止，测定样品的吸光度值，该值与样品中呋喃妥因代谢物残留量呈负相关，与标准曲线比较即可得出呋喃妥因代谢物的浓度。