[发明专利]一种前列腺癌症早期的综合检测试剂盒及检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种前列腺癌症早期的综合检测试剂盒及检测方法和应用。

【背景技术】

根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数170万，死亡人数近160万，患者600万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800万，患者约有8400万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度报告，“认为人类在抗癌大战中是失败”，也就是说癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1.肿瘤细胞异质性；2.肿瘤细胞耐药性；3.抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。

本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因是：1.不能做到真正的早期诊断；2.转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体征)，这一概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的是在这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实：一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长；一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨(有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中)，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)或突破血管壁早期转移时，就能做到早期预测诊断。

几十年来，PSA在前列腺癌的诊断和治疗中具有划时代的意义。然而，近些年来越来越多低丰度PSA前列腺癌被诊断，PSA对前列腺癌诊断的敏感性和特异性越来越受到质疑。Stamey等对1317例前列腺癌根治患者分析发现，1983-1988年间与1999-2003间相比：直肠指诊阳性率由91％降到17％；患者平均年龄由64岁降至59岁；肿瘤的体积由5.3cm降至2.4cm；平均PSA水平由25ng/ml降至8nh/ml；前列腺体积由44g增至53g。研究者认为，1983-1988年间PSA前列腺癌密切相关，而1999-2003年间PSA仅与前列腺增生(体积)相关。Bader等报告1493例前列腺癌根治术患者中，有相当部分的前列腺癌患者PSA水平低(8ng/ml)，而且这部分病人与前列腺增生难以鉴别。2004年Stearns ME等采用逆转录聚合酶链反应、DAN蛋白结合测定法、免疫印迹等方法证实，PCADM-1是前列腺癌相关诊断标记物1。PCADM-1只在前列腺癌组织表达，在BPH、高分级前列腺上皮内瘤和精囊组织无表达，在其它肿瘤均无表达，而且PCADM-1表达的强度随着Gleasson评分增加而增强(+1——+5)。采用酶联免疫吸附方法检测尿液，结果表明，PCADM-1是前列腺癌特异的尿中肿瘤标记物。他们对533例患者(包括前列腺癌、BPH、有尿路症状患者和正常对照)尿中PCADM-和血清PSA的比较研究结果表明，尿PCADM-1检测敏感性为79％，特异性为83％，而血清PSA检测敏感性<50％特异性为55％。

目前对PCADM-1基因和PSA基因的研究都用于科研方面，不适应临床应用，特别是个性化的应用在我国现阶尚不见报道。根据现有的文献资料PCADM-1基因和PSA基因的检测技术及诊断试剂盒未见报道。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。