[发明专利]一种早期子宫癌原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种早期子宫癌原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用。 

【背景技术】

根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数160万，死亡人数近160万，患者600万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800万，患者约有8400万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。子宫癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，近年来发病率稳定上升且趋年轻化。子宫肿瘤是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性肿瘤中居第二位，据世界范围统计，每年估计46.6万的子宫颈肿瘤发病例。其中80％的病例发生在发展中国家。我国每年新发现子宫癌病13.5万，约占全球发病数的1/3，是我国妇科恶性肿瘤的第一位。世界妇科学新研究显示：子宫癌发病均源于人乳头瘤病毒感染(HPV)。子宫癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌。我国自50年代末期就积极开展了子宫癌的防治工作，如上海纺织系统、江西靖安县及其他一些坚持开展筛查的地区均取得了显著的成效。全国子宫颈癌的死亡率(中国人口年龄调整率)由70年代的10.28/10万下降到90年代的3.25/10万，下降了69％。与世界其他国家比较，也由70年代的高水平下降到中等水平。但由于我国地域广阔、人口众多，每年仍有新发病例约10万，约占世界子宫癌新发病例总数的五分之一。近几年来，据一些国家和地区报道，子宫癌的发病和死亡率大致稳定，但局部有增 长的趋势，特别是子宫颈癌的年轻病例有所增加。近年，我国部分地区也有子宫癌病人年轻化趋势的报道。尽管在过去的20年间，我国子宫癌的死亡率大幅度下降，但在我国中西部的部分地区，子宫癌的发病与死亡率几十年来却始终居高不下。如甘肃武都、山西阳城等县，子宫颈癌死亡率高达36.00/10万，超过全国子宫癌死亡率的10倍，远高于世界平均水平。子宫癌从癌前变到形成癌症，需求八至十年时间，如何做到早期检测和诊断是降低发病率和死亡率的关键。常规的涂片检查只能诊断是否是癌细胞，也就是说找到癌细胞已是晚期，往往病人的生存期不长。如何在更早期发现(癌变前期)它有非常重要的临床意义。美国所有的主要健康组织都认为对癌症的早期检测是挽救生命，降低晚期治疗费用的关键。 

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。 

美国研究人员Gorodeski博士在实验中发现，P2RX7基因能够区分癌、癌症前期和正常组织，P2RX7基因成为首个能够检测细胞癌变潜力的生物标记。他们最初在实验室的细胞培养中就已观察到，子宫癌细胞、子宫上皮细胞增生细胞和正常子宫上皮细胞，P2RX7基因和P2RX7蛋白表达都不同，子宫癌症表达最低，子宫上皮细胞增生细胞表达中等度，正常子宫上皮细胞表达90-100％。用同样方法他们分析了临床病例和正常人，结果相同。P2RX7基因广泛存在于机体上皮组织和上皮细胞中，它是现今唯一能够在肿瘤发生之前区分癌变前组织的标记物。将P2RX7基因的检测技术(组合的基因诊断试剂盒)用来筛选临床妇科子宫癌的资料未见报道。 

原位杂交技术(in situhybridization)是将分子生物学与细胞化学技术 结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。 

中国专利文献CN1556221公开了“IC53基因及其相关产物诊断和治疗结肠癌的用途及一种诊断结肠癌的试剂盒”。中国专利文献CN1769485公开了“栉孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法及其试剂盒”。中国专利文献CN1556410公开了“一种鱼类病毒的检测试剂盒及其检测方法”。中国专利文献CN1680597公开了“一种用于定量检测丙型肝炎病毒(HCV)的荧光定量PCR试剂盒”。中国专利文献CN2918435，公开了“一种检测肥胖相关基因SNP的寡核苷酸芯片及试剂盒”。但是，关于P2RX7基因的原位杂交检测试剂盒及其检测技术未见报道。 

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题是，提供一种早期子宫癌原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用。及早发现子宫癌，降低子宫癌的发病率和死亡率。