[发明专利]一种CD326基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种CD326基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用。 

【背景技术】

根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数170万，死亡人数近160万，患者600万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800万，患者约有8400万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。 

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度报告，“认为人类在抗癌大战中是失败”，也就是说癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1.肿瘤细胞异质性；2.肿瘤细胞耐药性；3.抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。 

本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因是：1.不能做到真正的早期诊断；2.转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体征)，这一概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的是在 这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实：一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长；一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨(有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中)，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。 

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆)时或肿瘤干细胞的存在及突破血管壁早期转移时，就能做到早期预测诊断。 

多年前，研究人员已发现癌症转移患者及放、化疗后血液中CD326的浓度要比正常人高得多，而且持续性增高，与中肿瘤的复发、转移密切相关。但一直不知道它们在细胞当中的功能及癌细胞发生变化的相关性。近来的研究发现，许多癌症(结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌等癌的肿瘤干细胞都表达很高水平CD326。肿瘤干细胞在肿瘤细胞中所占比例较低，自我更新和持续再生为新肿瘤的能力很强。肿瘤干细胞对多种化疗都耐药，这可能是为什么目前大多数治疗不能通过根除所有肿瘤细胞来根治肿瘤的主要原因。许多癌症的肿瘤干细胞表达CD326，CD326是一个常见的高表达的肿瘤相关抗原，将它作为肿瘤干细胞的存在靶标有非常重要的临床诊断意义。CD326在许多癌症中表达过度。他作于癌症复发、转移的基因诊断早期指标有非常重要的临床意义。 

目前对CD326基因的研究检测技术、方法多用于科研方面，不适应临床应用，特别是个性化的应用在我国现阶段条件尚未发现。根据现有的文献资料CD326基因的检测试剂盒及相关技术未见报道。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。 

中国专利文献CN1556221公开了“IC53基因及其相关产物诊断和治疗结肠癌的用途及一种诊断结肠癌的试剂盒”中国专利文献CN1769485公开了“栉孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法及其试剂盒”。中国专利文献CN1556410公开了“一种鱼类病毒的检测试剂盒及其检测方法”。中国专利文献CN1680597公开了“一种用于定量检测丙型肝炎病毒(HCV)的荧光定量PCR试剂盒”。中国专利文献CN2918435，公开了“一种检测肥胖相关基因SNP的寡核苷酸芯片及试剂盒”。但是，关于CD326基因的原位杂交检测试剂盒及其检测技术未见报道。 

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题是，提供一种CD326基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用。