[发明专利]纤维素酶的两阶段共水解方法

权利要求书

1、一种纤维素酶的两阶段共水解方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步、生物质冲洗去除杂质，切成1到2厘米的小段，置于69℃到71℃烘箱中干燥至恒重，然后将剪切好的生物质用碱进行预处理，具体方法为：将剪好的生物质置于指质量体积比为2％的氢氧化钠溶液中，其中氢氧化钠溶液的体积数值为放入的生物质的质量数值的3.8到4.2倍；在84℃到86℃水浴58到62分钟，然后用蒸馏水洗至pH至7，置于烘箱中干燥至质量不再增加；

第二步、用预处理后的生物质制备里氏木霉ZM4-F3水解产糖培养基，然后将里氏木霉ZM4-F3置于该水解产糖培养基中，在29℃到31℃、195到205rpm摇床的水解条件下水解47到49小时；

第三步、将铜绿假单胞菌BSZ-07接种至种子培养基中培养至对数生长期；

第四步、将培养至对数生长期的铜绿假单胞菌BSZ-07接种至发酵产剂培养基中，接种浓度为里氏木霉ZM4-F3接种浓度的4％；然后在温度为32℃、pH值为5.5的条件下进行两株菌的共水解。

2、根据权利要求1所述的纤维素酶的两阶段共水解方法，其特征是，第一步中所述的生物质是指：稻草、玉米皮、麦麸、玉米芯、稻壳等植物纤维。

3、根据权利要求1所述的纤维素酶的两阶段共水解方法，其特征是，第二步中所述的水解产糖培养基各组分的质量百分比为：生物质为2.9％，麸皮为0.97％，Mandels微量元素盐溶液为0.48％，磷酸二氢钾为0.04％，硫酸铵为0.16％，硫酸镁为0.01％，蛋白胨为0.1％，蒸馏水为85.9％。

4、根据权利要求1所述的纤维素酶的两阶段共水解方法，其特征是，第三步中所述的种子培养基各组分的质量百分比为：牛肉膏为0.3％，NaNO₃为0.1％，(NH4)₂SO₄为0.1％，Na₂HPO₄为0.12％，KH₂PO₄为0.1％，MgSO₄·7H₂O为0.001％，CaCl₂为0.0002％，蒸馏水为99.3％。

5、根据权利要求1所述的纤维素酶的两阶段共水解方法，其特征是，第四步中所述的发酵产剂培养基各组分的质量百分比为：葡萄糖为0.2％，酵母膏为0.01％，NH4NO3为0.05％，机油为0.2％，KH2PO4为0.1％，Na2HPO4为0.1％，MgSO4·7H2O为0.002％，微量元素溶液为0.05％，蒸馏水为92.3％。