[发明专利]一种具有免疫调节作用的龙须菜纯多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然植物活性多糖的提取分离技术领域，具体地说涉及一种龙须菜纯多糖的制备方法。

背景技术

龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)是江蓠属(Gracilaria Greville)的一种温带性红藻。原产于我国山东省沿海和日本冲绳岛，近年来在广东、福建等省实现规模化养殖，产量逐年增加。龙须菜其主要用途是作为琼胶生产的原料，也可做为鲍鱼饲料及绿色食品开发，另外龙须菜的栽培有利于改善沿海海水水质，具有环境修复作用。

但有关龙须菜深加工方面的研究很少。目前国外未见有关龙须菜生物活性方面的研究报道，国内也只有少数学者对龙须菜多糖的生物活性进行了初步研究，研究发现其具有抗突变、抗肿瘤、清除自由基和抗氧化作用。有关龙须菜多糖调节免疫活性方面的研究，中国专利CN101100488A正在公示一种在较高温度下提取龙须菜活性多糖的方法。该方法虽获得对小鼠淋巴细胞具有较高增殖效果的龙须菜多糖，但提取的多糖并非纯品多糖，不利于明确活性成分和进一步研究作用途径。

发明内容

本发明提供一种具有免疫调节作用的龙须菜纯多糖的制备方法。

本发明采取的技术方案：采用由一种具有免疫调节作用的龙须菜纯多糖的制备方法，其方案是：包括如下步骤：

1)、原料处理，2)、多糖提取，3)、超滤分级，4)、离子柱层析，5)、凝胶柱层析，6)、成品收集。

实施本发明后的积极效果是：

本发明提取了龙须菜纯品多糖，不仅可提供市场需要，还为深入研究龙须菜纯多糖其在抗突变、抗肿瘤、清除自由基和抗氧化作用，以及调节免疫活性方面机理的研究创造了条件。

附图说明

图1为龙须菜纯多糖制备流程图

图2为制备的龙须菜纯多糖HPSEC层析结果图

具体实施方式

现结合附图对本发明作进一步说明

一种具有免疫调节作用的龙须菜纯多糖的制备方法，包括如下步骤：

1)、原料处理

龙须菜干品粉碎后，留下过60目筛的龙须菜干品粉，4℃保存备用；

2)、多糖提取

龙须菜藻粉以水重复提取3次，具体方法：以1:20-50重量比加入蒸馏水，每小时搅拌1次，在20-28℃室温下，提取12h，提取液4000r/min(或6层纱布过滤后再滤纸抽率)分离残渣。最后合并提取液。

3)、超滤分级

提取液经截留分子量为10万的膜超滤，截留液减压浓缩、-20℃保存；

4)、离子柱层析

截留液经DEAE-Sepharose Fast Flow(琼脂糖凝胶)离子交换柱层析(2.6×100cm)，先用蒸馏水洗脱，再用NaCl梯度洗脱，最大浓度2.0mol/L；收集样品峰，用截留分子量为8,000-12,000Da透析袋，蒸馏水透析3-5天，-20℃保存；5)、凝胶柱层析

取离子柱下来的样品，进行凝胶柱Sephacryl S500(丙烯葡聚糖凝胶)分离(1.6×100cm)；流动相为0.2mol/L亚硝酸纳，流速0.5mL/min，5mL/管收集，示差折光检测器检测并收集样品峰；

6)、成品收集

浓缩后，蒸馏水透析3-5天，冷冻干燥收集，即为龙须菜纯多糖。

实施例1

①、原料处理

龙须菜干品粉碎后留下过60目筛的龙须菜干品粉，4℃保存备用。

②、多糖提取

称取龙须菜藻粉5Kg，以重量比1:20加入蒸馏水，每小时搅拌1次，室温下提取12h，提取液4000r/min离心10min(或6层纱布过滤后再滤纸抽率)分离残渣，残渣再重复提取2次，合并提取液。

③、超滤分级

提取液经截留分子量为10万的膜超滤，截留液减压浓缩、-20℃保存。

④、离子柱层析

制备浓度为8-10mg/ml截留液。经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析(2.6×100cm)，先用蒸馏水洗脱，再用NaCl梯度洗脱，最大浓度2.0mol/L，上样量：8mg/ml，共48ml。60min后开始收集，15ml/管，样品峰2-20管，浓缩后，用截留分子量为8-12kD透析袋，蒸馏水透析3-5天，-20℃保存。

⑤、凝胶柱层析