[发明专利]孕早期唐氏综合征产前筛查试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于唐氏综合征产前筛查的试剂盒。

背景技术：

唐氏综合征(Down’s syndrome，DS)，又称21三体综合征或先天愚型，是人类最常见的一种染色体疾病，也是造成先天智力低下的主要原因，该病的临床主要表现为：严重的智力低下，独特的面部和身体畸形(如宽眼距，低鼻梁，肌无力，肢体短小及通贯手等)，先天性心脏病，消化道畸形等；按比例计算，其出生率约占活产新生儿的1/600～1/800；此外，与一般的基因病(如常染色体显/隐性遗传，或性染色体显/隐性遗传)不同，DS这类染色体病是偶发的，每个孕妇都有一定的危险性，而且一般没有种族或家族积聚的现象。

唐氏综合征的患儿多数寿命较短，生活自理性差，给家庭和社会造成极大的经济负担和精神压力。近年来随着环境污染加重，该病有上升的趋势。目前尚缺乏有效的治疗手段，只有通过产前诊断，终止妊娠，才能达到优生的目的。由于DS的产前诊断必须依靠侵入性的基因诊断技术如羊膜腔穿刺取羊水细胞进行遗传学检查、绒毛活检等，而侵入性操作可导致1％～2％的流产率，且有羊膜腔束带综合征，截肢损伤等副作用，此外产前诊断技术要求及所需费用高，而DS的发生率毕竟为1.5％左右，因此不可能对每位孕妇都进行诊断。所以，这就需要通过产前筛查来提高产前诊断的效率。

发明内容：

本法发明的目的是提供一种操作简单、灵敏度高、特异性好、无污染的孕早期唐氏综合征产前筛查试剂盒。主要解决现有侵入性的基因诊断技术容易导致流产的技术问题。

为实现上述目的，本发明通过以下方案实施：

一种孕早期唐氏综合征产前筛查试剂盒，其特征在于：试剂盒由PAPP-A(妊娠相关血浆蛋白A)包装盒、fhCGβ(游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位)包装盒，所述PAPP-A包装盒内有PAPP-A校准品、PAPP-A单克隆抗体包被板条、PAPP-A铕标记物、分析缓冲液、荧光增强液、浓缩洗液、样本稀释液、板架组成；所述fhCGβ包装盒内有fhCGβ校准品、fhCGβ单克隆抗体包被板条、fhCGβ铕标记物、分析缓冲液、荧光增强液、浓缩洗液、板架组成。

所述PAPP-A、fhCGβ单克隆抗体包被板条的制备方法：将PAPP-A或fhCGβ单克隆抗体以碳酸盐缓冲液稀释适当比例后加入微孔板内，过夜后洗涤、封闭、干燥，而后将包被板条装入铝箔袋内，冷藏备用。

所述PAPP-A、fhCGβ铕标记物的制备方法：将PAPP-A或fhCGβ单克隆抗体以碳酸盐缓冲液透析后与DTTA-Eu(N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠)以3∶1比例混合，静置24小时，后经Sephacryl S-200(聚丙烯酰胺葡聚糖S-200)分离柱分离DTTA-Eu与Ab-Eu(铕标记抗体)，获得铕标记过的单克隆抗体。

所述PAPP-A、fhCGβ校准品的制备方法：将PAPP-A浓度为80000mIU/L溶液以稀释液稀释至10、40、200、800、2000mIU/L，以0.5ml装量冻干即可。将fhCGβ浓度为100000ng/mL溶液稀释成2、5、20、100、200ng/mL，以0.5ml装量冻干即可。

所述荧光增强液的配制方法，以无水乙醇溶解β-NTA(β-萘酰三氟丙酮)、TOPO(三辛基氧化膦)，再加邻苯二甲酸氢钾和三蒸水，40℃溶解后，加入乙酸、TritonX-100(壬-(乙二醇)苯辛基醚)，调PH值至3.2，并定容。

所述使用方法包括以下步骤：

fhCGβ测定

A.使用前将浓缩洗液以蒸馏水按1∶25(体积比)稀释，加入洗板机洗涤瓶中。

B.每瓶校准品中精确加入0.5ml蒸馏水，轻摇混匀，室温(+20℃～+25℃)放置30分钟。

C.将分析缓冲液、待测样品、校准品和所需数量的微孔反应板条平衡至室温(+20℃～+25℃)。

D.使用前一小时内，根据所需用量以分析缓冲液将铕标记物稀释50倍。

E.在微孔底部依次加入10μl校准品(双孔)或待测样品。

F.将稀释后的铕标记物按200μl/微孔加入(弃去第一次溶液)。

G.于室温(+20℃～+25℃)下于慢档振动60分钟(±5分钟)。

H.以洗液洗涤各板条6次，洗涤后若有少量液体残留，将板条在干净无尘的吸水纸上拍干。

I.采用干净的专用取样头移取增强液，按200μl/微孔加入(弃去第一次溶液)，于慢档振动5分钟。