[发明专利]检测日本血吸虫抗体的ELISA试剂盒及其检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及检测日本血吸虫抗体的ELISA 试剂盒，及对应的检测方法和应用。

背景技术

日本血吸虫病是一种广泛流行于亚洲的中国、菲律宾等国家的人畜共 患寄生虫病，目前针对日本血吸虫病只有一种有效的治疗药物—吡喹酮。 由于长期大规模使用这种药物，有可能使血吸虫产生抗药性，血吸虫病的 诊断仍然是防治血吸虫病的重要手段。血吸虫的诊断技术是寻找并确定指 示血吸虫在机体存在的直接或间接的证据，为血吸虫感染的临床诊断提供 依据。通过诊断结果还可以了解疾病的传播情况，有可能在感染的初期及 时发现，随即采取相应的措施有效地控制疾病的大规模传播。虽然Kato Katz的粪检方法仍然是日本血吸虫病诊断的金标准，但该方法在中度或 低度血吸虫病流行区域的敏感性并不令人满意，漏检率较高。另外，在评 估血吸虫病流行情况尤其是连续收集同一个体的粪样时，有些居民对于反 复检查显得并不是十分配合。为了解决这一问题，至今逾半个世纪研究者 们一直致力于免疫学诊断方法的研究，研制出来多种免疫学诊断方法并做 了相关的优化。据估计，中国血吸虫病免疫学诊断方法的数量为全球之最。 免疫学诊断因其良好的敏感性、特异性以及实用性等优点，已经成为当前 血吸虫病的常用诊断方法。

目前常用于日本血吸虫病的免疫诊断方法主要包括：间接血凝试验 (IHA)、免疫酶联吸附试验(ELISA)、胶体金标记技术等。

免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是以 酶标记的抗体或抗原为主要试剂的检测方法，属于一种标记免疫技术，在 各种诊断方法中，ELISA是人们研究的最为详细的一种。

1971年Engvall和Perlmann用ELISA对IgG进行了定量的测定。严 自助和吕再缨首先用ELISA检测日本血吸虫感染家兔的特异性抗体，取 得较好的效果(严自助，吕再婴.免疫酶标记技术及应用的初步研究.中 华医学杂志，1978，88：470-473)。由于循环抗体在患者接受有效治疗后仍 可以长期存在故不能区别现症感染和既往感染，不宜作疗效考核之用，而 循环抗原常提示有活虫存在，因此一般认为可通过检测循环抗原来判断现 症患者和考核疗效。

随着杂交瘤技术的引入，多用特异性较高的单抗检测循环抗原。在我 国多种单克隆抗体被用于研究检测血吸虫病患者体内的循环抗原，但对低 感染度的受检者，检测循环抗原的灵敏度是尚有待于解决的难题。曾报导 的有：McAb IIID10(娄文娴，钱宗立，薛纯良，等.抗日本血吸虫单克隆抗 体的制备及其在诊断中的应用.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1991，9 (4)：254-257)、1B10A(严自助，吕再缨，王文，等.单克隆抗体Dot-ELISA 检测血吸虫病循环抗原的研究II.中国血吸虫病防治杂志，1990，2(2)： 39-41)、3D8A(严自助，王文，吕再缨，等.单克隆抗体Dot-ELISA检测日 本血吸虫病循环抗原的研究I.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1990，8(3)： 161-163)、8SE4(裘丽姝，薛海筹，陆键，等.抗血吸虫成虫表膜抗原单克 隆抗体检测循环抗原及免疫复合物的实验研究.中国寄生虫学与寄生虫 病杂志，1990，8(3)：177-179)、NP30(管晓红，仇镇宁，马磊，等.日本血 吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定.中国寄生虫病与寄生 虫血杂志，1991，9(4)：261-264)等，但这些单克隆抗体对于慢性血吸虫 病患者的敏感性仍然有待提高。传统制备单克隆的方法是通过杂交瘤技术 获得只分泌一种特异性抗体的杂交瘤细胞，Chen DX等人用构建噬菌体 展示抗体文库的方法来制备单克隆抗体，为了获得抗血吸虫的一种单链可 变片段抗体(sc-Fv)，所构建的文库用ELISA的方法以日本血吸虫成虫代 谢抗原来检测，结果显示了sc-Fv在血吸虫诊断中的潜在价值，同时也为 大批量制备抗日本血吸虫单克隆抗体提供了一种新的选择。