[发明专利]艾滋病(HIV-1/2)唾液快速检测试剂

权利要求书

1.一种艾滋病(HIV-1/2)唾液快速检测试剂其特征是用于检测唾液中艾滋病抗体，可用于临床诊断。(1).以HIV重组抗原构建高灵敏度的双抗原夹心法系统，用于检测唾液中的特异性HIV抗体：高度纯化的HIV重组抗原HIV-1 gp41、P24和HIV-2 gp36、高灵敏度的双抗原夹心法系统构建。(2).抗HIV抗原HIV-1 gp41、P24和HIV-2 gp36单克隆抗体细胞株克隆、筛选、鉴定，大规模单克隆抗体细胞培养和收获，以及单克隆抗体纯化。(3).上述两个检测系统中金标记物的制备：高灵敏度的双抗原夹心法系统和高灵敏度的双抗体夹心法系统中金标记物的制备。(4).唾液的快速样品浓缩技术：唾液作为待测样品进行检测时，由于唾液中含有的特异性抗体和抗原的含量要较血清或血浆少的多，这就需要该检测系统的灵敏度更强。本项目使用的浓缩垫可使样品在加样瞬间浓缩10～100倍，从而提高检测系统的敏感性。

2.原材料选择与制造

(1)NC膜：选用美国Milipore或国产膜公司膜，膜孔径(5-8)um。

(2)滤纸垫片：普通实验用滤纸；

(3)样品稀释液：PBS缓冲液；

(4)抗原胶体金记物(HIV-1/2)重组蛋白抗原和抗HIV-1 gp41，P24和HIV-2 gp36单克隆抗体胶体金记物)；

特异性抗原：选用基因工程表达的重组蛋白HIV-1 gp41、P24和HIV-2 gp36作为固相抗原。

3.工艺过程和技术参数的确定

(1)艾滋病重组抗原(HIV-1 gp41、P24和HIV-2 gp36)和抗HIV-1 gp41，P24和HIV-2 gp36单克隆抗体的胶体金标记

(2)30～40nm胶体金溶液的制备；

(3)胶体金溶液结合重组抗原最佳浓度和量的选择；

(4)试剂盒半成品和成品制备过程中需确定的主要技术参数

(5)抗原喷点浓度、体积和量；

(6)完成检测步骤所需时间的确定。

4.最佳抗原喷点浓度和抗原胶体金标记物工作浓度

以标准阳性和阴性血清为测试样品，在保证试剂盒性能(如灵敏度、特异性和精密度)前提下，采用方阵滴定选择最佳包被抗原或抗体浓度、待测样品稀释浓度和胶体金记抗体相应的工作浓度，以及加样体积。根据重复3次的测试结果，确定本试剂盒的配方、参数和条件。