[发明专利]用微生物混合菌株制备红景天液态转化发酵物的方法

说明书

技术领域

本发明属于从红景天藏中药材中提取有效活性成分的技术领域，具体涉及一种用微生物混合菌株制备红景天液态转化发酵物的方法，该方法使发酵物中所含的有效活性成分大大提高。

背景技术

红景天是指景天科红景天属植物，在世界上有90余种，多分布在北半球的高寒地带，大多数都生长在海拔3500-5000米左右的高山流石或灌木丛林下。我国现发现有73种，主要分布在我国西藏的高山高寒地带，另外东北、西北、华北的一些地区也有红景天资源分布。

红景天的主要药用部位是根茎，其中所含的主要有效成份红景天甙和酪醇(甙元)，具有抗疲劳、抗缺氧、抗诱变和抑制肿瘤等功效，且无副作用(宋月英等，红景天属植物化学成分及药理作用的研究进展中草药.2004，35(2).-235-236；李刚等藏药红景天的药理学研究进展中国民族医药杂志.2004，10(3).-38-40；王家明闫继平王盛虔红景天的药理作用研究进展中医药学报.2003，31(4).-57-59)，因此，在药品和保健食品的开发中得到了广泛的应用。

由于对红景天的大量开发利用，使这种高原藏区野生药材资源已面临枯竭的危机。而目前采用的红景天活性成分制备工艺大多是用醇类(乙醇等)直接浸泡红景天原料进行提取。这种方法只能提取其中存在的有效活性成分，而其中的有效活性成分含量又很低，如红景天苷的含量约为0.6～0.7％。面对大量的社会需求，如何在当前提取法的基础上开发新的制备方法，以提高红景天原药材的利用率，已成为当前本领域急需解决的问题。已报道的新工艺方法有化学合成法，植物细胞组织培养法以及用单一菌株的微生物转化法。这些方法均是在醇类提取工艺之前，欲通过不同来源获得或增加有效成分，期望减少野生资源的用量。其中微生物转化法从提高红景天本身的有效成分来说是最具应用前景的方法，如专利申请“一种微生物转化制备红景天提取物的方法”(申请号200610146107.2)公开的技术就是采用单一微生物菌株进行转化发酵的方法。虽然该方法能提高红景天本身的有效成分，但因其最高只能提高有效活性成分含量约30％，故提高有限，还不够理想，尤其是作为增加了微生物菌株转化发酵工序所带来的成本，与所提高的有效活性成分含量的价值相比，只能处于盈亏平衡点附近，使其生产应用价值不大。

发明内容

本发明的目的是针对已有的采用单一微生物菌株进行转化发酵提高红景天有效成分方法存在的缺陷，提供一种用微生物混合菌株制备红景天液态转化发酵物的方法，该方法能大幅提高红景天原药材中有效活性成分，在利用同等量原药材的条件下，能获得更多的提取产物，使野生藏中药材得到充分利用。

本发明提供的用微生物混合菌株制备红景天液态转化发酵物的方法，该方法的工艺步骤和条件为：

1)将红景天根茎粉碎至60～120目，优选80～120目，更优选80目；

2)在每100份的红景天粉中加入800～1000份水，优选800～900份，0.5～2份酵母膏，优选1～2份，0.5～2份磷酸二氢钾，优选1～2份，和0.2～0.5份硫酸镁，优选0.2份，搅拌混合均匀，使之成为红景天液态水悬液，并灭菌；

3)在含红景天粉的液体种子培养基中分别制备曲霉属中的黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(Aspergillus oryzae)的菌丝培养物；

4)将制备的两种霉菌的菌丝培养物按重量比2～8∶8～2混合后，将混合菌丝培养物接种于红景天液态水悬液中，接种量按湿重计为每100份水接种5～20份；

5)将接种后的制备物在温度28～32℃下保温培养发酵48～60小时，优选温度30℃，培养时间50小时即可，

以上所用物料份数均为重量份。

以上接种的菌丝培养物的湿重是指将培养出来的菌丝培养物离心除去水分后的重量。

该方法中对红景天液态水悬液灭菌可在常规条件下进行，如在温度121℃灭菌30分钟。

该方法中所用的菌丝培养物是这样培养的：先将粒径为80目的红景天粉和水按1∶10重量份混合，再按水的重量份计分别加入0.2％的酵母膏、0.1％的磷酸二氢钾和0.05％的硫酸镁，配成液体种子培养基，然后在液体种子培养基中分别接入曲霉属(Aspergillus)中的黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(Aspergillus oryzae)孢子，在温度30℃下摇床培养2天，离心后弃去上清液，收集菌丝沉淀。