[发明专利]一种魔芋指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种魔芋指纹图谱的建立方法。

技术背景

指纹图谱的研究开发与应用始于对中药材产品质量的监控。中药指纹图谱是借鉴法医学“指纹”的概念，包括中药DNA指纹图谱、蛋白质指纹图谱和化学指纹图谱等。我们所说的指纹图谱是指化学指纹图谱。

指纹图谱有两个特点：一是通过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪或产地；二是通过指纹图谱主要特征峰的面积或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保产品质量的相对一致。目前，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效的手段，但魔芋的化学指纹图谱方面的研究目前尚未见报到。

发明内容：

本发明的目的是为建立魔芋指纹图谱提供一种新的方法，并由此方法得到魔芋的指纹图谱。

为达到本发明的目的所采用的技术方案：用高效液相色谱法建立魔芋指纹图谱的方法，具体包括如下步骤

(a)试样的制备：取魔芋组织杀青烘干，研碎，称样于试管中，用纯净水定容，过滤，按照植物氨基酸的分析方法，对试样进行衍生；

(b)色谱条件：用高效液相色谱仪或氨基酸分析仪，流动相A为乙酸钠-三乙胺缓冲液，流动相B：乙腈，流动相C：超纯水；柱温37℃，流速0.5-1.2mL/min；检测波长：230-260nm；色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；

(c)测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

进一步优选的方法可以通过下述步骤实施：

(a)试样的制备：取魔芋组织杀青烘干，研碎，称取于试管中，用纯净水定容，过滤，按照植物氨基酸的分析方法，对试样进行柱前衍生；

(b)色谱条件：色谱柱为美国Waters公司提供的C₁₈柱：流动相A为pH＝4.95的140mM乙酸钠-三乙胺缓冲液，流动相B：100％乙腈，流动相C：100％超纯水；柱温37℃，流速1.0-1.2mL/min；检测波长：248nm；

(d)测定：精密吸取供试品溶液0.1～25μl注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

本发明最佳的检测方法可以通过下述步骤实施

(a)试样的制备：取魔芋组织于115℃杀青10min，80℃烘干，研碎，称取0.5000g于试管中，加纯净水10mL，于80℃干燥箱中保温12小时，取出，用纯净水定容至10mL，滤纸过滤后，溶液用0.45μm滤膜过滤，按照植物氨基酸的分析方法，对试样进行柱前衍生；

(b)色谱条件：用高效液相色谱仪或氨基酸分析仪，流动相A为pH＝4.95的140mM乙酸钠-三乙胺缓冲液，流动相B：100％乙腈，流动相C：100％超纯水；柱温37℃，流速1.0-1.2mL/min；检测波长：248nm；色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；

(c)测定：精密吸取供试品溶液8μl注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

本发明可以根据通过分析指纹图谱中特征峰与魔芋品种、品质、抗性、产量、生长状况等的关系，为魔芋资源收集整理、分类、新品种选育、研究新型氨基酸农药防治魔芋病害等科研工作提供技术指导。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本实用新型作进一步详细的说明。

附图1为正常花魔芋的指纹图谱；

附图2为软腐病花魔芋的指纹图谱；

附图3为白魔芋的指纹图谱；

附图4为珠芽魔芋的指纹图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明：

本发明的实施实例1：

(a)试样的制备：取正常花魔芋(Normal A.Konjac)、软腐病株花魔芋(Erwinia carotvora A.Konjac)、白魔芋(Normal A.albus)、珠芽魔芋(NormalA.bulbifer)叶片于115℃杀青10min，80℃烘干，研碎，称取0.5000g于试管中，加纯净水10mL，于80℃干燥箱中保温12小时，取出，用纯净水定容至10mL，滤纸过滤后，溶液用0.45μM滤膜过滤，用AccQ.Tag法测定水溶性氨基酸含量；