[发明专利]5－氨基－3－氰基－1－(2，6－二氯－4－三氟甲基苯基)－4－苯基吡唑作为杀虫剂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及5-氨基-3-氰基-1-(2，6-二氯-4-三氟甲基苯基)-4-苯基吡唑作为杀虫剂的应用。

背景技术

氟虫腈(Fipronil，见下)是20世纪90年代中期成功开发的一种高效杀虫剂。它属于苯基吡唑类化合物，能有效防治半翅目、鳞翅目、缨翅目等害虫和其他一些对现有杀虫剂产生抗性的害虫。氟虫腈作为杀虫剂的另外一大优点就是对昆虫活性高，而对哺乳动物毒性较低。日本科学家就氟虫腈对大鼠DRG神经元GABA_A受体的调控作用进行了详细研究。结果表明氟虫腈能缓慢抑制GABA诱导离子流，IC₅₀值为1.6μM，且氟虫腈对受体的抑制作用发生在通道打开之前。氟虫腈的商业成功刺激了含有2，6-二氯-4-三氟甲基取代基的相关芳基异环化合物的研究(见图1)。化合物JKU 0422(吡唑)、SN606011(三唑)和LY219048(spirosultam)等为典型的GABA受体非竞争性拮抗剂，对相关化合物的研究，是人们开发杀虫剂的热点。

5-氨基-3-氰基-1-(2，6-二氯-4-三氟甲基苯基)-4-苯基吡唑作为氟虫睛的类似物，现有技术没有任何记载它作为杀虫剂的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供5-氨基-3-氰基-1-(2，6-二氯-4-三氟甲基苯基)-4-苯基吡唑作为杀虫剂的应用。

本发明将所用的5-氨基-3-氰基-1-(2，6-二氯-4-三氟甲基苯基)-4-苯基吡唑在甲醇、甲苯等溶剂中溶解加入表面活性剂，5-氨基-3-氰基-1-(2，6-二氯-4-三氟甲基苯基)-4-苯基吡唑在药液中的浓度为(1-100)mg/L，可用该药液对植物茎叶等器官表面喷施或拌种，防治农作物害虫。5-氨基-3-氰基-1-(2，6-二氯-4-三氟甲基苯基)-4-苯基吡唑特别是针对鞘翅目、半翅目、鳞翅目、缨翅目等十分有效。

为了证明本发明的5-氨基-3-氰基-1-(2，6-二氯4-三氟甲基苯基)-4-苯基吡唑作为杀虫剂的用途，发明人在实验室采用了如下的测定方法进行生物活性测定：

家蝇脑膜蛋白的制备：震荡干冰冰冻的成年家蝇，在干冰温度下，通过2mm直径的分子筛分离家蝇头部与体部组织，再通过1mm直径的分子筛过滤，回收家蝇的头部组织，于约20ml含0.25mol/L蔗糖的10mmol/L Tris-HCl缓冲溶液(pH 7.5)中经聚四氟乙烯-玻璃匀浆器匀浆，浆液稀释两倍后经低温离心分离(500g)5min，上曾悬浮物通过四层64mm直径的尼龙孔网过滤后，经低温高速离心(25000g)30min，所得下层蛋白重新悬浮于上述缓冲溶液中，并于冰浴下保持30min，再经低温高速离心(25000g)30min后，将下层蛋白悬浮于10mmol/L磷酸钠和300mmol/L NaCl(pH 7.5)的缓冲溶液中，该蛋白溶液定量后可直接用于受体-配体结合实验。

大鼠头膜组织(Rat Head Membrane)的制备：雄性五周龄的Wistar大鼠经颈部脱位致死后，取出全部脑组织，于1mM乙二胺四乙酸(EDTA)中匀浆，然后于1000g下离心10min。取上清液于25000g下离心30min。最终沉淀物悬浮于1mM EDTA溶液中，装入具有玻璃纸的透析管，在冰浴下采用经蒸馏的去离子水透析，内层悬浮物于25000g下离心30min，丸状小球即是所需产物，储存于-80℃备用，于结合实验的当天，重新悬浮于所述的磷酸缓冲溶液中开始实验。

蛋白质测定：本实验采用经过改进的Bradford方法测定蛋白质。以5mg/10ml的结合缓冲溶液溶解牛血清白蛋白，并依次稀释到0μg/0.2ml、25μg/0.2ml、50μg/0.2ml、75μg/0.2ml、100μg/0.2ml。然后分别加入5ml CBB G-250溶液，不同的溶液经紫外分析仪(UV-120-02)在595nm处检测，其结果绘出校准曲线。取50μl上述方法制备的家蝇头膜组织溶液稀释到0.2ml，然后加入5ml CBB G-250溶液，在同样的条件下，采用紫外分析仪(UV-120-02)在595nm处检测。家蝇头膜组织溶液稀释到200μg/0.9ml备用。

I)亲和性测定过程：