[发明专利]利用超滤膜分离怀牛膝提取液中活性成分的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及中药活性成分的分离方法，具体是利用超滤膜分离怀牛膝提取液中活性成分的方法。

(二)现有技术目前怀牛膝提取液的分离多以成分间的极性差异为基本原理来进行分离。怀牛膝提取液中除含有齐墩果酸、多糖等活性成分外，还含有大量的植物蛋白、鞣质、淀粉、细菌等大分子物质以及许多微粒、絮状物，这些物质不但没有药效作用，而且对中药复方制剂后期调配及产品的稳定性产生较大影响。而传统的分离工艺(溶剂沉淀、萃取技术)很难将这些物质完全去除，并且在除杂过程中不同程度地存在以下问题：第一、操作步骤复杂，条件苛刻、能耗高、生产周期长；第二、无效成分去除率和有效成分保留率不够高，影响药效的充分发挥；而吸附分离技术(大孔树脂)虽能很好的去除这些杂质，但此技术操作步骤复杂，并且过分强调单个组分，使中药失去了原有的复方特色，影响药效。

(三)本发明的目的就是提出一种利用超滤膜分离怀牛膝提取液中活性成分的方法，为中药复方制剂或中药酒剂的后期配制提供质量稳定的中间体；本方法活性成分透过率高，透过液浊度低，操作简单，能耗低，生产周期短。

本方法包括下述步骤：a.将分离液以膜孔径为0.05um、膜材质为AL₂O₃的陶瓷微滤膜机组过滤，操作温度：45～75℃，跨膜压力：0.05～0.25Mpa，得滤液；b.微滤结束后，截留液用水顶洗3次，每次顶洗量为截留液体积的2倍，得微滤及顶洗合并液；c.将所得合并液用超滤膜机组过滤，操作温度：35～45℃、跨膜压力：0.6～1.0Mpa、膜管型号为5万，得超滤液；d.截留液用水顶洗3次，顶洗温度35-40℃，每次顶洗量为截留液体积的2倍，得超滤及顶洗合并液；合并液中齐墩果酸及多糖的透过率分别大于或等于98.73％和99.72％，透过液浊度小于或等于2.70NTU。

所述怀牛膝提取液是在怀牛膝中投入12倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1.5h所制得的合并液。

所述怀牛膝提取液的固液分离采用碟片式离心机，转速为6000r/min。

所述陶瓷微滤膜机组的组合方式是将两根陶瓷膜管并联为一组，再将两组串在一起组成两并两串式，每根装0.05um膜芯9根，共36根。

所述超滤膜机组是采用5-8根超滤膜并联，其中每根超滤膜膜管装5万分子量膜芯4根，共计20-32根膜芯，总膜面积800-1000平方米。

本发明通过分析传统工艺中的一些不足，并根据怀牛膝中有效成分和杂质组成情况，采取相应规格的微滤膜及超滤膜对怀牛膝提取液中的活性成分进行分离，即将怀牛膝提取液通过超滤膜分离选择性去除其中的一些大分子物质(植物蛋白、胶质、鞣质、细菌等)，最大限度的保留活性成分齐墩果酸、多糖等，并将其用于中药复方制剂或中药酒剂的后期调配，从而达到稳定终产品质量的目的。

本工艺与传统工艺的区别在于，传统工艺主要利用不同组分在不同溶剂中溶解度的不同而实现分离，而超滤膜分离技术是以具有选择透过性的膜为分离介质，在某种驱动力(压力差)的作用下，物料中不同分子量、不同空间结构的成分依据滤膜孔径的大小或通过或被截留，达到分离去杂的目的，它实现了中药有效部位的分离，充分有效地保留了中药原方配伍成分。

虽然超滤技术已经在中药活性成分分离中得到应用，但每一种中药材由于其活性成分及杂质的组成不同，它们的微观分子结构不同，分离后分离液的使用方式不同，因此，采用什么型号的膜管膜芯，膜管的组合方式以及操作条件来进行分离，是膜分离中要解决的关键问题。

为筛选出本工艺的最佳工艺参数，本发明以不同操作条件下活性成分超滤透过率及透过液的浊度为考核指标进行实验，具体实验情况如下：

表1 九种操作条件一览表

表2 不同操作条件下活性成分的透过率

【注】：超滤进料液中齐墩果酸总量：10223.51mg，多糖总量：421.03g

透过率＝透过液中某一成分含量/进料液中某一成分总量

表3 不同操作条件下超滤膜透过液的浊度变化情况

通过超滤膜活性成分透过率及透过液浊度综合比较优选出本工艺过程最佳操作参数为：温度35～45℃、跨膜压力：0.6～1.0Mpa、膜管型号：5万。

由于齐墩果酸及牛膝多糖的含量测定尚无统一方法，本发明中专门摸索并建立了齐墩果酸及牛膝多糖含量测定方法。经验证，本检测方法易于操作，重现性好。

具体测定方法如下：

齐墩果酸的测定(紫外-可见分光光度法)

1、对照品溶液的配制：