[发明专利]注射用香菇多糖的一种分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学，更具体涉及多糖分离纯化。

背景技术

香菇多糖(lentinan)系伞菇科真菌香菇子实体中提取纯化的一种单一组分多糖(I)，是一种免疫调节型抗肿瘤药物，它通过增强机体的抗肿瘤免疫防御反应而产生细胞介导的抗肿瘤效果，发挥间接的抗肿瘤作用，对正常细胞不产生毒副作用，因此香菇多糖是国际公认安全有效的抗肿瘤药物(参考发明专利200410086152.4)。临床上香菇多糖主要用于胃癌、肺癌、肠癌及癌性腹水等恶性肿瘤的治疗，另外香菇多糖对提高肝炎及艾滋病病人的免疫功能均有较好作用。

1985年香菇多糖最先在日本作为抗肿瘤药物进入临床，我国1988年开始进口日本味之素的香菇多糖。目前国内市场上销售的主要是南京振中生物工程有限公司生产的注射用香菇多糖(ZL专利号00112407.2)，其原料药生产工艺系参考文献“Chihara.G.，Maeda.Y.，，Hamuro.G.，et al.Inhibition of mouse sarcoma 180 by polysaccharides from Lentinus edodes(berk.)sing.Nature，1965，222，687-688”，生产过程中要用到十六烷基三甲基铵、氯仿、正丁醇、醋酸等大量的有机试剂，工艺流程十分复杂，劳动强度大，环境污染大，而且香菇多糖的得率非常低，仅为0.15％，成本相当高，1mg香菇多糖的价格达200元以上，极大地限制了香菇多糖的临床应用。故寻找一种工艺简单、产率高、成本低廉的香菇多糖提取纯化方法是更好地发挥香菇多糖制剂临床作用的首要任务，有利于减轻患者经济负担，将给广大癌症患者带来福音，也有利于节约资源和保护环境，将大大地造福于人类。

发明内容

本发明的目的在于提供注射用香菇多糖的一种新的分离纯化方法，本发明涉及的技术路线系采用水提醇沉法结合三氯醋酸法去蛋白得到香菇多糖粗品，香菇多糖粗品经过氧化氢脱色得脱色多糖，脱色多糖再经超滤得注射用香菇多糖。

本发明包括以下具体步骤：a.取新鲜香菇或干香菇，经粉粹或不经粉粹；b.采用热水提取，浓缩；c.乙醇沉淀分离粗多糖；d.三氯醋酸去蛋白；e.乙醇沉淀；f.过氧化氢脱色；g.乙醇沉淀；h.超滤除杂质多糖和小分子；i.冷冻干燥。

其中所述的采用热水提取、浓缩的具体方法是：加入相当于香菇干重8倍体积水，沸水提取2次，浓缩至相当于香菇干重的2倍体积，得浓缩液；所述的浓缩液经乙醇沉淀分离得粗多糖的具体方法是：向浓缩液中加入乙醇，使溶液乙醇浓度达50％以上，分离沉淀，得粗多糖；所述的三氯醋酸去蛋白的具体方法是：粗多糖以水溶解得粗多糖溶液，加入粗多糖溶液体积1～2倍、浓度为5％三氯醋酸溶液，得去蛋白溶液；所述的经乙醇沉淀得去蛋白多糖的具体方法是：向去蛋白溶液中加入乙醇，使溶液乙醇浓度达50％以上，分离沉淀，得去蛋白多糖；所述的的去蛋白多糖以水溶解后用过氧化氢脱色得脱色溶液具体方法是：用水溶解去蛋白多糖，滴加30％过氧化氢溶液，所加的过氧化氢的量为调过氧化氢终浓度为5～15％，过氧化氢脱色中水浴温度为40～60℃水浴，得脱色溶液；所述的脱色溶液经乙醇沉淀得脱色多糖的具体方法是：向脱色溶液中加入乙醇，使溶液乙醇浓度达50％以上，分离沉淀，得脱色多糖；所述的超滤除杂质多糖和小分子的具体方法是：取脱色多糖，加0.5M氢氧化钠溶液溶解，以0.5M盐酸溶液调pH值至6～8，溶液置超滤杯中超滤，超滤膜截留分子量为10000～300000Da，得超滤液；

本发明得到的注射用香菇多糖为白色粉末，含量为98～102％，重均分子量Mw为400000～800000Da(见图2)，得率为0.67％(以终产品与干香菇质量比计算)；傅立叶红外光谱显示香菇多糖的特征吸收，主要特征为：在3350～3300cm^-1处为糖环上O-H的伸缩振动、在2925～2915cm^-1处为糖环上C-H的伸缩振动、在1100～1000cm^-1处为糖环上C-O的伸缩振动、在898～884cm^-1处为β吡喃糖的C₁-H弯曲振动，见图1。以上香菇多糖特征均符合国家药品标准WS1-320(X-263)-2004Z。