[发明专利]注射用香菇多糖的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学，更具体涉及多糖分离纯化。

背景技术

香菇多糖(lentinan)系伞菇科真菌香菇子实体中提取纯化的一种单一组分多糖(I)，是一种免疫调节型抗肿瘤药物，它通过增强机体的抗肿瘤免疫防御反应而产生细胞介导的抗肿瘤效果，发挥间接的抗肿瘤作用，对正常细胞不产生毒副作用，因此香菇多糖是国际公认安全有效的抗肿瘤药物(参考发明专利ZL 200410086152.4)。临床上香菇多糖主要用于胃癌、肺癌、肠癌及癌性腹水等恶性肿瘤的治疗，另外香菇多糖对提高肝炎及艾滋病病人的免疫功能均有较好作用。

1985年香菇多糖最先在日本作为抗肿瘤药物进入临床，我国1988年开始进口日本味之素的香菇多糖。目前国内市场上销售的主要是南京振中生物工程有限公司生产的注射用香菇多糖(ZL专利号00112407.2)，其原料药生产工艺系参考文献“Chihara.G.，Maeda.Y.，，Hamuro.G.，et al.Inhibition of mouse sarcoma 180 by polysaccharides from Lentinusedodes(berk.)sing.Nature，1965，222，687-688”，生产过程中要用到十六烷基三甲基铵、氯仿、正丁醇、醋酸等大量的有机试剂，工艺流程十分复杂，劳动强度大，环境污染大，而且香菇多糖的得率非常低，仅为0.015％，成本相当高，1mg香菇多糖的价格达200元以上，极大地限制了香菇多糖的临床应用。故寻找一种工艺简单、产率高、成本低廉的香菇多糖提取纯化方法是更好地发挥香菇多糖制剂临床作用的首要任务，有利于减轻患者经济负担，将给广大癌症患者带来福音，也有利于节约资源和保护环境，将大大地造福于人类。

发明内容

本发明的任务是提供注射用香菇多糖的一种新的分离纯化方法，使其具有工艺简单、产率高、成本低廉等特点。

实现本发明的技术方案是：本发明提供的注射用香菇多糖分离纯化方法系采用水提醇沉法结合三氯醋酸法去蛋白得到香菇多糖粗品，香菇多糖粗品经过氧化氢脱色得脱色多糖，脱色多糖再经凝胶色谱法得注射用香菇多糖。

本发明提供的注射用香菇多糖的分离纯化方法包括以下步骤：

a.取新鲜香菇或干香菇，经粉粹或不经粉粹；

b.采用热水提取，浓缩；

c.乙醇沉淀分离粗多糖；

d.三氯醋酸去蛋白；

e.乙醇沉淀；

f.过氧化氢脱色；

g.乙醇沉淀；

h.凝胶色谱法除杂质多糖和小分子；

i.冷冻干燥。

上述步骤中所述的采用热水提取，浓缩的具体方法是：加入相当于香菇干重8倍体积水，沸水提取2次，浓缩至相当于香菇干重的2倍体积，得浓缩液；所述的乙醇沉淀分离粗多糖的具体方法是：向浓缩液中加入乙醇，使溶液乙醇浓度达50％以上，分离沉淀，得粗多糖；所述的三氯醋酸去蛋白的具体方法是：用水溶解粗多糖得粗多糖溶液，加入粗多糖溶液体积1～2倍、浓度为5％三氯醋酸溶液，得去蛋白溶液；所述的向去蛋白溶液中加入乙醇，使溶液乙醇浓度达50％以上，分离沉淀，得去蛋白多糖；所述的过氧化氢脱色的具体方法是：去蛋白多糖以水溶解，滴加30％过氧化氢溶液，调终浓度为5～15％，过氧化氢脱色中水浴温度为40～60℃水浴，得脱色溶液；所述的过氧化氢脱色后的乙醇沉淀的具体方法是：向脱色溶液中加入乙醇，使溶液乙醇浓度达50％以上，分离沉淀，得脱色多糖；所述的凝胶色谱法除杂质多糖和小分子的具体方法是：取脱色多糖，以交联葡聚糖凝胶SephadexG-150或Sephadex G-200为固定相，0.01～0.05M氯化钠或0.01～0.05M硫酸钠为流动相，进行凝胶色谱分离，收集香菇多糖组分溶液；除杂质多糖和小分子；所述的冷冻干燥的具体方法是：将收集的香菇多糖组分溶液置冷冻干燥机内冻干，得白色粉末状注射用香菇多糖。