[发明专利]一种缩短北虫草子实体生长周期的培育方法

说明书

技术领域：

本发明涉及快速培养北虫草子实体的方法，进一步将是提供一种可以缩短北虫草子实体生长周期的培育方法，属于生物菌类培养方法技术领域。

背景技术

北虫草(Cordyceps militaris)是指真菌的菌丝通过各种方法侵染鳞翅目昆虫，以昆虫体内的物质行寄生生活，通过不断的发育和分解后最终伸出昆虫体表，而形成的一种真菌与虫体外壳共存的生物体。其主要功效成份虫草素明显高于冬虫夏草。

随着人们生活水平的提高及保健意识的增强，做为保健、药品主要原料之一的虫草需求量日益增加，加之虫草的采集，严重破坏了野生植被。虫草属国家明令禁止野外采集并加以保护的野生物种资源。为了满足市场的需求，人工培养北虫草已成为当前的发展趋势。而目前国家普遍采用cordyceps miltitaris菌株为北虫草生产菌，该菌株在固体培养子实体的生长过程中存在着生长周期长，大约40d到50d左右，给生产管理及提高单位产量都带来了一定的制约。

发明内容

本发明提供一种可以缩短北虫草子实体生长周期的培育方法，应用纳米技术使植物生长素缓慢释放，目的旨在快速高产培养固体北虫草子实体，在保证北虫草子实体的营养成份不变的基础上缩短生长周期同时，将植物生长素的喷洒次数降至最低，从而提高北虫草子实体的产量，减低劳动。

本发明的技术解决方案包括以下操作步骤：

1.北虫草的培育

①马铃薯培养基

②将北虫草菌株接种于PDA斜面，26℃恒温箱中培养7天，向斜面试管中注入无菌生理盐水，振荡后用无菌脱脂棉过滤，制成浓度约为3*10⁷个/mL的孢子悬液。

③栽培培养基：85份大米+15份蛹粉，含水量65％，分装于玻璃瓶内，121℃35分钟灭菌备用。

④用灭过菌的枪头将制好的孢子悬液加入米饭培养基，每罐头瓶培养基加2mL孢子悬液(孢子浓度为3*10⁷个/mL)，后用灭过菌的竹筷将米饭搅拌均匀，用封口膜封好，转入培养室培养。温度控制在23℃左右，空气相对湿度为60％左右，黑暗培养，菌丝封底后室内增加散射光，培养料表面或四周有桔黄色色素形成，即进入子实体管理时期。

⑤菌丝转色完成后，为刺激子实体原基形成，增加光照和温差刺激，每天光照不少于10h，温度19-25℃，相对湿度60-80％，每天通风10min以补充新鲜空气，蛹虫草子座长出后，增加光照强度，在500-700lx的散射光照，温度保持23℃左右，空气湿度65％左右，每天通风换气3次，每次10min。

2.羟基磷灰石纳米粒子-植物生长素制备及喷洒

①溶液配置

溶液A配制：准确称取无水乙酸钙0.705g，加重蒸水定容至10ml，摇匀备用；

溶液B配制：准确称取磷酸二氢铵1.381g，乙酸铵4.008g，加重蒸水45ml，用浓氨水调节pH值在7.6左右，补加重蒸水定容至50ml，摇匀备用；

②羟基磷灰石纳米粒子-植物生长素制备

步骤1准确称取赤霉素1mg，溶液B溶解，缓慢搅拌；

步骤2将溶液A逐渐滴加到溶液B中，保持反应体系温度在37±1℃，pH值7.4±0.2之间，缓慢搅拌1小时；

步骤3反应液4℃下10000rpm/min离心15分钟；

步骤4离心后沉淀室温下干燥48小时，4℃保存。

③称取羟基磷灰石纳米粒子-植物生长素0.2g，用水定容1000ml，备用。

④在培养瓶培养大约7天左右，即已从营养生长阶段向生殖生长阶段过渡时，将0.1％的植物生长素喷洒在菌表面。由于羟基磷灰石纳米粒子-植物生长素具有缓慢释放作用，因此在北虫草生活周期中只需要喷洒一次。

⑤培养至26天左右，子实体可长高到8-9cm左右，即可下架采摘。

为表明本发明的积极效果，通过以下单因素实验(包括不同培养原料、培养基含水量、PH值和不同温度、光照对子实体干重及质量的影响)对北虫草固体培养条件进行比较：

原料：选择不同的原料，复合原料均为9份大米+1份的其他原料(大米+蛹、大米、麦粒、玉米餷、大米+麦鼓、大米+豆粉)，每条件处理10瓶。计算平均产量，即子实体的干重(g/瓶)。

蛹粉浓度优化：在原料优化的基础上，进一步考察蛹粉不同浓度对栽培的影响，每条件处理10瓶。

原料含水量：选择85份大米+15份蛹粉作为原料，每瓶固体原料40g，加不同体积的水设置不同含水量，每条件处理10瓶。