[发明专利]用高速逆流色谱法从人参果中分离制备高纯度人参皂苷Re的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用高速逆流色谱法从人参果中分离制备高纯度人 参皂苷Re的方法，可广泛应用于生物、制药、环保和农业等领域中 活性物质的分离纯化。

背景技术：

人参果为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey)的成熟果实。 人参果中含有皂苷、多糖、生物碱、甾醇、挥发油、氨基酸、无机元 素等多种化学成分。药理学研究表明其具有降低血糖、抗休克、保护 心肌、保护肾功能、增强免疫力以及延缓衰老、提高记忆能力等多种 药理作用。人参果中皂苷含量丰富，其中又以Re含量最高，人参皂苷 Re被《中国药典》规定为人参属植物及其产品的质量控制成分，同时 还是人参及其制品指纹图谱的标志性成分。

以前报道的人参皂苷Re分离制备主要是采用柱色谱法，需要使 用固体填料，易产生不可逆吸附，具有样品易损失、易污染、低效、 速度慢、成本高和分离步骤繁琐等缺点。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种用高速逆流色谱法从人参果中分离 制备高纯度人参皂苷Re的方法，高速逆流色谱技术不需使用固体填 料，应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下 进行天然产物的分离纯化，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、 无污染、高效、快速和大制备量分离的优点。

本发明的技术方案是这样实现的：用高速逆流色谱法从人参果中 分离制备高纯度人参皂苷Re的方法，其特征在于：采用分析型高速 逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪的较大量制备；其 工艺过程如下：

将人参果的果渣用70％乙醇溶液浸泡过夜，超声提取30min，反 复提取三次，提取液过滤后浓缩得人参果粗浸膏；

按如下体积比选用乙酸乙酯0.5-2、正丁醇4-7、水6-9为溶剂 系统体系置于分液漏斗中，摇匀后静止分层；待平衡一段时间后分离 上、下相，以上相为固定相，下相为流动相；取人参果粗提物溶解于 2ml下相中待用；在室温在16-28℃条件下用高速逆流色谱仪进行分 离，将固定相注满色谱分离柱，开启速度控制器，当达到预定转速时， 开始以一定流速泵入流动相，当流动相流出时，通过六通进样阀进样； 由首端向尾端洗脱，主机正转，转速为1300r/min，定时收集组分。

本发明的积极效果是：提供了一种不需使用固体填料，没有不可 逆吸附，样品无损失、无污染、高效、快速、低成本和大制备量分离 人参皂苷Re的方法，获得的人参皂苷Re纯度可达98％以上，适用于 从多种工艺条件制备的人参果粗提物中分离制备人参皂苷Re。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明做进一步的描述：

实施例1：

将人参果的果渣用70％乙醇溶液浸泡过夜，超声提取30min，反 复提取三次，提取液过滤后浓缩得人参果粗浸膏；

按如下体积比选用乙酸乙酯0.5、正丁醇4、水6为溶剂系统体 系置于分液漏斗中，摇匀后静止分层；待平衡一段时间后分离上、下 相，以上相为固定相，下相为流动相；取人参果粗提物溶解于2ml下 相中待用；在室温在16-28℃条件下用美国产CCC-3000型高速逆流 色谱仪进行分离，将固定相注满色谱分离柱，开启速度控制器，当达 到预定转速时，开始以一定流速泵入流动相，当流动相流出时，通过 六通进样阀进样；由首端向尾端洗脱，主机正转，转速为1300r/min， 定时收集组分。

实施例2：

将人参果的果渣用70％乙醇溶液浸泡过夜，超声提取30min，反 复提取三次，提取液过滤后浓缩得人参果粗浸膏；

按如下体积比选用乙酸乙酯2、正丁醇7、水9为溶剂系统体系 置于分液漏斗中，摇匀后静止分层；待平衡一段时间后分离上、下相， 以上相为固定相，下相为流动相；取人参果粗提物溶解于10ml下相 中待用；在室温在16-28℃条件下用美国产CCC-3000型高速逆流色 谱仪进行分离，将固定相注满色谱分离柱，开启速度控制器，当达到 预定转速时，开始以一定流速泵入流动相，当流动相流出时，通过六 通进样阀进样；由首端向尾端洗脱，主机正转，转速为900r/min，定时 收集组分。

实施例3：

将人参果的果渣用70％乙醇溶液浸泡过夜，超声提取30min，反 复提取三次，提取液过滤后浓缩得人参果粗浸膏；

按如下体积比选用乙酸乙酯1、正丁醇6、水7为溶剂系统体系 置于分液漏斗中，摇匀后静止分层；待平衡一段时间后分离上、下相， 以上相为固定相，下相为流动相；取人参果粗提物溶解于10ml下相 中待用；在室温在16-28℃条件下用美国产CCC-3000型高速逆流色 谱仪进行分离，将固定相注满色谱分离柱，开启速度控制器，当达到 预定转速时，开始以一定流速泵入流动相，当流动相流出时，通过六 通进样阀进样；由首端向尾端洗脱，主机正转，转速为900r/min，定时 收集组分。