[发明专利]菱角多糖及其提取方法及其药物用途

说明书

技术领域

本发明属于中药领域。

背景技术

菱角(Water caltrop)被中华人民共和国药典(2005年版一部)及中药大辞典所收载，为菱科植物菱的果实，具有清热、解渴、健脾、益气明目之功效。前期的实验表明菱角的水提物具有良好的抗肿瘤活性，对于菱角多糖部分的活性尚未见文献报道。

恶性肿瘤已经成为人类生命的三大杀手之一，医学界在寻求和使用抗癌药物的同时，发现许多化学抗癌药物在作用于靶细胞时往往累及正常细胞，但植物药的遗传毒性不太明显，表明中草药在抗癌抗突变方面有其独特的优势和广阔的应用前景。近些年来单味中药及中药复方防治肿瘤作用的研究已取得一定成绩。

发明内容

本发明提供一种菱角多糖及其提取方法及其药物用途。本发明菱角多糖是由下列制备方法得到的：

一、称取菱角皮置于提取器内，以8～10倍体积的蒸馏水浸泡8～10天，加热煮沸3～4小时，过滤后再以3～5倍体积的水重复提取1～2次，合并深色提取液，过滤，浓缩至相对密度1.15-1.20(50℃)；

二、加入2～3倍量95％乙醇沉淀，并不断搅拌，过滤，将沉淀加水充分溶解，3000rpm离心15min，去除不溶性杂质；

三、用2～3倍量95％乙醇沉淀，4℃，静置15-20小时，3000rpm离心15min；沉淀依次用95％乙醇、无水乙醇脱水，再用乙醚脱去乙醇后，置于盛有P₂O₅及NaOH的真空干燥器内真空干燥，得粗多糖；

四、粗多糖纯化

a、将粗多糖溶解，配成5％的糖液，氯仿-正丁醇溶液体积比为1∶0.2，按粗多糖溶液与氯仿-正丁醇溶液，体积比为(2-5)∶1，加入一具塞容器中，振荡30min，离心15min，吸取上层水相保留，弃掉氯仿相与蛋白沉淀，按上述方法重复除蛋白3次，干燥；

b、除色素，采用活性炭法脱色，将多糖配成5％的糖液，加3％的活性炭，70℃水浴中加热2小时，冷却，抽滤除去活性炭。

本发明菱角多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明提供菱角多糖及其制备方法，菱角多糖具有抗肿瘤作用。药效学实验表明，菱角多糖对Hela、U₂₅₁细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用。本发明药物用法用量，口服剂量以生药量计算0.5克-3克/次，一日三次。

附图说明

图1是24h后对照组Hela细胞。

图2是多糖处理24h后Hela细胞。

图3是24h后对照组U₂₅₁细胞。

图4是多糖处理24h后Hela细胞。

图5菱角多糖对U₂₅₁细胞的生长抑制曲线。

图6菱角多糖对Hela细胞的生长抑制曲线。

具体实施方式

下面通过具体药效学实验例来进一步证明其抗肿瘤作用。

1.MTT法测定多糖对肿瘤细胞增殖的抑制作用

取对数生长期的人宫颈癌细胞Hela，人神经胶质瘤细胞U₂₅₁接种于96孔板中，每孔100μL，密度为8×10⁴·mL^-1，置于37℃、5％CO₂的培养箱中培养24h，待细胞贴壁后加入不同浓度的多糖，使其终浓度分别为：1000、500、250、125、62.5、31.25，15.625、7.8125μg·mL^-1，每个剂量设3个平行孔，对照孔以等体积的IMDM代之。将培养板置37℃、5％CO₂的培养箱中继续培养24h后，加入MTT，每孔20μL，继续培养4h后，吸出培养液，加入DMSO 150μL，震荡10min后置酶标仪上于570nm波长测各孔吸光度值，各重复孔的吸光度值取平均值，计算菱角多糖各组分对Hela，U₂₅₁细胞的抑制率。

抑制率计算公式为：

2.结果与分析

2.2菱角多糖对Hela和U₂₅₁细胞的体外抑瘤作用

2.2.1细胞形态的变化倒置显微镜下观察对照组和各实验组细胞形态变化，发现随着菱角多糖浓度的增加Hela和U₂₅₁细胞的增殖受到明显抑制。