[发明专利]基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法有效
申请号: | 200810051163.7 | 申请日: | 2008-09-12 |
公开(公告)号: | CN101358926A | 公开(公告)日: | 2009-02-04 |
发明(设计)人: | 魏辉;陈朝贵;韩冰雁;汪尔康 | 申请(专利权)人: | 中国科学院长春应用化学研究所 |
主分类号: | G01N21/78 | 分类号: | G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/00 |
代理公司: | 长春科宇专利代理有限责任公司 | 代理人: | 马守忠 |
地址: | 130022吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 纳米 探针 标记 比色 测定 方法 | ||
1.基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法,具体涉及测定牛小肠碱性磷酸酶的方法,其步骤如下:
(1)参考Doty,R.C.;Tshikhudo,T.R.;Brust,M.;Fernig,D.G.,Extremely stable water-soluble Ag nanoparticles.Chem.Mater.2005,17,(18),4630-4635所述的方法合成银纳米探针;
(2)将5mM三磷酸腺苷和牛小肠碱性磷酸酶加入到反应缓冲溶液中,混合均匀,37℃水浴反应20min;
所述的5mM三磷酸腺苷∶牛小肠碱性磷酸酶∶反应缓冲溶液的体积比为1∶1∶4;
所述的反应缓冲溶液为含1mM MgCl2的pH 9.0的50mM三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液;
所述的牛小肠碱性磷酸酶浓度为0.001unit/μL到0.1unit/μL;
若进行比色反应的特异性测定,将牛小肠碱性磷酸酶替换为25μM牛血清白蛋白、或10μMα-凝血酶、或2.1μM胰蛋白酶即可;
(3)向(2)中的反应液中加入银纳米探针和0.5M NaCl水溶液;
所述的5mM三磷酸腺苷∶银纳米探针∶0.5M NaCl水溶液的体积比为1∶40∶3;
(4)将(3)中反应液,与水混合均匀,马上测定反应溶液的吸收光谱,或者直接用肉眼观察溶液的颜色变化,完成基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法,具体涉及测定牛小肠碱性磷酸酶的方法;所述的(3)中反应液∶水的体积比为1∶3。
2.基于银纳米探针无标记比色测定酶,具体涉及测定抑制剂对牛小肠碱性磷酸酶活性的抑制的方法,其步骤如下:
(1)参考Doty,R.C.;Tshikhudo,T.R.;Brust,M.;Fernig,D.G.,Extremely stable water-soluble Ag nanoparticles.Chem.Mater.2005,17,(18),4630-4635所述的方法合成银纳米探针;
(2)将1unit/μL牛小肠碱性磷酸酶与Na3VO4混合均匀,37℃水浴反应10min;
所述的1unit/μL牛小肠碱性磷酸酶∶Na3VO4的体积比为1∶1;所述的Na3VO4浓度为0.5微摩尔每升到100毫摩尔每升;
(3)将5mM三磷酸腺苷加入到(2)的反应液中,混合均匀,37℃水浴反应20min;
所述的1unit/μL牛小肠碱性磷酸酶∶5mM三磷酸腺苷的体积比为1∶1;
(4)向(3)中的反应液中加入银纳米探针和0.5M NaCl水溶液;
所述的5mM三磷酸腺苷∶银纳米探针∶0.5M NaCl水溶液的体积比为1∶40∶3;
(5)将(4)中反应液,与水混合均匀,马上测定反应溶液的吸收光谱,或者直接用肉眼观察溶液的颜色变化,完成基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法,具体涉及测定抑制剂对牛小肠碱性磷酸酶活性的抑制的方法;所述的(4)中反应液∶水的体积比为1∶3。
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