[发明专利]丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及含有抗体的医药配制品，或单克隆抗体的制备，具体是一种丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体及其用途。 

背景技术

随着社会无偿献血事业的广泛开展，实践证明丙氨酸氨基转移酶(Alanine Transaminase，ALT)检测不合格是造成当前血站血液报废的主要原因。 

ALT是人体内反映肝细胞损伤的重要酶类之一，检测血清ALT有助于鉴别输血相关肝炎病毒携带者，同时也可以在一定程度上弥补某些肝炎病毒标志物未被检测及感染“窗口期”的缺陷，从而减少由于ALT不合格造成的血站血液报废。街头采血车工作人员对献血前ALT的筛选可以有效减少和降低血液报废率。传统的ALT检测采用酶化学法，由于反应时间长，需要特殊检测设备，携带不方便，酶试剂不稳定，难以实现快速检测。 

中国专利1231341公开了“一种丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒”，其包括酶试剂、基质液、丙氨酸氨基转移酶、参考血清、参考血清复溶液以及试条，其特征在于：酶试剂的组成为：丙酮酸氧化酶3IU/L，过氧化物酶3IU/L，维生素C氧化酶5IU/L，黄素腺嘌呤二核苷酸36μmol/L；基质液的组成为：L-丙氨酸0.50mol/L，α-酮戊二酸0.003mol/L，显色剂，亚铁氰化钾0.0168g/L；试条主要有转运膜和反应膜组成，转运膜覆盖在反应膜的一半处。 

中国专利101105491公开的“定量测定人体丙氨酸氨基转移酶的干化学试纸”，试纸由长条形的上、下支持层组成，在测试区从上到下依次为加样孔、底物层、显色层和测试孔。底物层可选用玻璃纤维、滤纸和无纺布等材料，浸渍有底物等试剂；显色层为各种滤纸、无纺布或合成膜，浸渍有色原等试剂。样品从加样孔进入底物层，转运至显色层的样品面，含有被检测成分的液体渗透至显色层的检测面，通过化学反应引起色原颜色的改变，通过下支持层上的测试孔在显色层的检测面即可测定光密度的变化。该试纸用于快速测定人体全血、血清或血浆中的丙氨酸氨基转移酶的活性，是肝功能检测的重要指标之一。 

但是，建立具有简便、快速、特异的优点的ALT免疫学分析方法，首先需要制备高特异性的抗ALT抗体。 

发明内容

本发明就是为了解决传统的酶化学法检测ALT，反应时间长，需要特殊检测设备，携带不方便，酶试剂不稳定，以及难以实现快速检测等问题，为建立具有简便、快速、特异的优点的ALT免疫学分析方法，而提供一种丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)及其用途。 

本发明是按以下技术方案实现的。 

一种丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体，该抗体具有抗人丙氨酸氨基转移酶的特异性，其是由保藏号CGMCC No.2322的杂交瘤细胞产生。 

所述的丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体，其杂交瘤细胞产生的抗体重链为IgG1亚类，轻链为κ型。 

所述的丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体，该抗体的间接ELISA法测定抗体效价，细胞培养上清为1∶10⁴，腹水为1∶10⁶。 

一种产生丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的杂交瘤细胞，其杂交瘤细胞anti-ALT 7D1，保藏号CGMCC No.2322。 

所述的丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体，其杂交瘤细胞染色体数目为95-106。 

所述抗人丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备方法，每次/只用20ug纯化的丙氨酸氨基转移酶抗原免疫BALB/C小鼠；取血清效价高于10^-4的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在50％PEG作用下融合；经次黄嘌呤、氨基喋呤、胸腺嘧啶核苷(HAT)选择性培养；用间接ELISA对杂交瘤细胞培养上清进行筛选后，阳性对照为免疫小鼠的多抗血清，阴性对照为骨髓瘤细胞SP2/0培养上清，A₄₅₀值为阴性对照2.1倍或以上者为阳性孔，对检测阳性孔用有限稀释法进行亚克隆，3轮后获得全部阳性单克隆。对杂交瘤细胞株及时进行冻存；同时取部分杂交瘤细胞于传代培养48h后加入秋水仙素至终浓度为0.04mg/L，继续培养6～10h，收集培养液，进行染色体分析、类别鉴定后，确定该杂交瘤细胞株为7D1；将该杂交瘤细胞冻存品复苏，扩大培养并接种于BALB/C小鼠腹腔，采集并纯化McAb腹水，作分子量及效价测定，即得抗人ALT的特异性ALT单克隆抗体(McAb)。 

一种丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的用途，该抗体用于检测人血清中的丙氨酸氨基转移酶。