[发明专利]大分子印迹琼脂糖聚合物微球及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于聚合物技术领域，特别涉及大分子印迹琼脂聚合物微球及其制备方法。

背景技术

近年来，在分子印迹技术领域中，越来越多的研究者开始关注大分子的印迹，并且对蛋白质大分子的印迹工作已经进行过许多研究。聚丙烯酰胺、海藻酸盐水凝胶均可作为大分子的印迹基材，并都有一定的印迹效果。然而，在制备过程中，丙烯酰胺的聚合容易使蛋白质变性，海藻酸盐需加入二价金属离子(如离子，锌离子等)才能进行凝胶化。

琼脂糖是从红海藻中提炼出来，主要由3-连接-β-D-吡喃半乳糖和4-连接-α-L-3，6-内醚-吡喃半乳糖构成的琼二糖组成，其重要特征是在较高温度(80℃以上)下可以形成琼脂糖水溶液，而将其降温到40℃左右开始凝胶，最终形成水凝胶。根据琼脂糖的这一特点，我们通过调节温度来制备大分子印迹聚合物微球，另外，在制备过程中，要保证在温度的变化范围内不使蛋白质变性。

目前还没有用琼脂糖微球做为大分子印迹基材的报道，因此本发明提供一种新型的大分子印迹基材。

发明内容

本发明的目的是提供一种大分子印迹琼脂糖聚合物微球。与非印迹琼脂糖微球相比，印迹微球的重结合性能有了较大的提高。

本发明的另一目的是提供一种以蛋白质为模板制备大分子印迹琼脂糖聚合物微球的印迹方法。

本发明的大分子印迹琼脂糖聚合物微球，其中粒径为30～500μm，琼脂糖质量百分含量为1％～4.8％。

本发明的一种大分子印迹琼脂糖微球，所述的蛋白质为卵白蛋白、溶菌酶或牛血清白蛋白。

本发明的大分子印迹琼脂聚合物微球的制备方法，其特征是采用反相悬浮凝胶法。

所述的反相悬浮凝胶法制备如下：将琼脂糖/水混合物加热到80℃以上形成琼脂糖溶液，然后将溶液放入恒温水浴中；将蛋白质溶液置于相同恒温水浴中；待两溶液恒温后，将其混合均匀；将混合液在机械搅拌下分散在恒温水浴中的有机油相中；用冰水浴降温成球后，静置使微球形成稳定水凝胶，然后用去离子水清洗微球；最后用缓冲溶液脱除模板分子后制得。

大分子印迹琼脂聚合物微球的制备方法，具体步骤：

a)将琼脂糖/水混合物加热到80℃以上形成琼脂糖溶液，将其置于38-50℃的恒温水浴中；

b)配制好的蛋白质溶液置于相同的恒温水浴中，待上述两溶液恒温后，将其混合均匀，混合溶液记为A；

c)将溶液A在搅拌的条件下加入到2～5倍溶液A体积、置于与前述同温水浴中的的有机相中，再搅拌15～30min，然后去水浴，进行0-40℃低温凝胶化反应5-30min，停止搅拌；

d)在0-40℃静置2h以上，最后脱除蛋白质模板分子后制得蛋白质大分子印迹琼脂糖微球。

所述的混合溶液A的组分质量百分含量：琼脂糖为0.99％％-4.8％；蛋白质为0.0137％～0.33％。

由于最终体系的蛋白质被脱除，所以大分子印迹琼脂糖微球各组分及其含量范围与所述A溶液各组分及其含量范围有所不同。

所述有机相是通常采用的有机相，其中溶解质量百分比为0～4％的表面活性剂或分散剂。

但是为了环保等的需要，也可以采用食用色拉油等为有机相。

所述搅拌速度为300-500r/min。

本发明所制备的大分子印迹琼脂糖微球，粒径在30-500μm，球形较好，见图2，经蛋白质重结合测试结果表明，印迹微球的重结合量能达到非印迹微球，即不加蛋白质制备的微球吸附量的1.2～5倍，见图3和图4。本发明采用反相悬浮凝胶法制备大分子印迹琼脂糖聚合物微球具有制备方法简单易行、凝胶过程易于控制等优点，能够制备出一种以琼脂糖为新型基材的具有较好重结合性的大分子印迹聚合物微球，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为本发明制备的对应卵白蛋白印迹琼脂糖聚合物微球的非印迹微球照片；

图2为本发明实施例3所制备的卵白蛋白印迹琼脂糖聚合物印迹微球照片；

图3为本发明实施例3所制备的卵白蛋白印迹琼脂糖聚合物微球对卵白蛋白的重结合曲线；

图4为本发明实施例3所制备的卵白蛋白印迹琼脂糖聚合物微球对卵白蛋白的印迹效率曲线。

具体实施方式

实施例1：

1将10ml水与1g琼脂糖混合物加热到80℃以上形成琼脂糖溶液，将其置于38℃的恒温水浴中；

2量取配制好的质量百分含量为0.029％的溶菌酶溶液10ml，置于38℃的恒温水浴中，待上述两溶液恒温后，将其等体积混合均匀，混合液记为A，此时A中琼脂糖质量百分含量为4.8％，蛋白质含量为0.0137％；