[发明专利]渔用肠溶口服疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于渔用口服疫苗领域。

背景技术

养殖鱼类的疾病呈逐年增加趋势，所造成的经济损失巨大，严重阻碍了水产养殖业的发展。目前控制各种疾病的主要手段是广泛、大量的投入化学药物和抗生素，而长期大量使用化学药物和抗生素的结果，产生了环境污染问题，致病性和非致病性微生物耐药性问题，以及药物残留超标的食品安全问题；例如多宝鱼事件就是典型的例子，受到多方密切关注。目前，国家已明令禁止生产和使用危害严重的药物。提高水产养殖疾病防控能力迫在眉睫。随着绿色环保食品和环境保护的要求以及免疫学技术的发展，免疫防治技术在疾病防治中的应用已越来越受到重视。应用疫苗、免疫增强剂等活化或加强动物自身的特异性和非特异性免疫功能，提高抗病能力，是今后防治病害最为有效的途径之一，是我国科学研究重点支持的领域之一。

国内外相继开展了应用疫苗防治养殖鱼类疾病的技术研究，制备了多种渔用疫苗，有浸泡、注射、口服三种剂型。由于浸泡接种具有疫苗消耗量大，免疫效果差的缺点，注射接种疫苗要求有一定的操作技术，且操作过程繁琐，工作量大，均不适宜生产应用。口服接种具有免疫效率高，疫苗需求量适中，操作方便的优点，适宜在生产中大规模应用，成为当前研究热点。

目前的研究主要集中在微粒、微胶囊方面。一种研究用聚乳酸-乙醇酸共聚物PLG和聚乙烯醇(产品型号1788)采用复乳挥发法制备嗜水气单胞菌口服疫苗，但没有报道PLG、聚乙烯醇组合比例，产品相对免疫保护率为42.9％(丁诗华，《西南农业大学学报》2005年27卷6期)。一种研究采用海藻酸钠、6％PVP-30制备了银鲫嗜水气单胞菌微胶囊疫苗，产品相对免疫保护率61.1％(李新华，《水生生物学报》2007年第31期)。这两种研究均是希望实现递送疫苗有效作用于肠道粘膜免疫相关淋巴组织的目的。但是，以上技术没有进行相关鱼类胃肠道消化生理特性的研究，也没有进行肠溶性实验观察，不能建立起适宜的疫苗控释技术，缺少微粒、微胶囊疫苗体内、体外释放的观察，不能明确微粒、微胶囊疫苗在胃肠道中的释放部位。其制备技术所采用的材料不具备确定的pH依赖性，只能实现口服递送并发挥一定的缓释作用，不能有效实现肠道释放的目的，如果疫苗释放过早，将被胃酸、消化酶消化、破坏，不能有效保护疫苗作用于肠道粘膜免疫相关淋巴组织。而且以上技术制备过程中需要将疫苗混溶到高分子材料的有机溶剂中，有机溶剂的存在会破坏疫苗的免疫源性，导致疫苗免疫效果不稳定，进一步限制了其在生产中的应用。

由于受胃肠道因素的影响，多数蛋白类药物易失活且吸收差，致使生物利用度差，其口服给药系统仍面临挑战。(疫苗口服接种及其微粒传输系统，李凤前，费轶博等，药学学报，2007年，42(3)：322-328。口服疫苗传递系统研究进展，宋洪涛，张倩等，解放军药学学报，2005年，21(1)：47-50)。因此，口服疫苗需要解决的关键点之一是如何保证疫苗顺利地通过胃部，而不被胃酸、胃消化酶环境所破坏，在肠道中充分释放，有效作用于肠道粘膜免疫相关淋巴组织，高效激发免疫应答。

发明内容

本发明的目的是提供一种鱼用肠溶口服疫苗的制备方法，采用多层功能性包被技术，通过改变含有疫苗的丸芯或微粒及其包被层的结构以及包被层成分及其含量，使其可以在鱼胃液中起到保护疫苗的作用，在鱼肠道中释放出疫苗，发挥免疫作用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：渔用肠溶口服疫苗，其特征在于，包括外周喷涂疫苗层2的颗粒或微丸1、在疫苗层2外逐层包衣隔离层3和肠溶层4；用于疫苗喷涂及隔离层包衣的干粉组合物A，和用于肠溶层包衣的干粉组合物B的组分及重量比分别为：

干粉组合物A：成膜剂选用羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一种或一种以上，重量比为40～60份；增塑剂选用三磷酸甘油酯、柠檬酸三乙酯或聚乙二醇的一种或一种以上，重量比为3～10份，防粘剂选用二氧化硅、硬脂酸镁、滑石粉或二氧化钛的一种或一种以上，重量比为30～50份，表面活性剂选用卵磷脂、吐温-80的一种，重量比为0～5份；

干粉组合物B：成膜剂是丙烯酸树脂、羟丙甲基纤维素酞酸酯或羧甲基纤维素钠的一种或一种以上，重量比为40～60份，增塑剂是邻苯二甲酸二乙酯或柠檬酸乙酰基三丁酯的一种或一种以上，重量比为10～20份，防粘剂是滑石粉、二氧化硅或二氧化钛的一种或一种以上，重量比为20～50份。

由于鱼用疫苗易受温度、酸碱度、胃蛋白酶影响，直接口服接种会损坏疫苗，降低疫苗免疫效果，无法口服给药。