[发明专利]消减免疫法制备大肠杆菌0157︰H7抗原单克隆抗体的方法无效
| 申请号： | 200810053955.8 | 申请日： | 2008-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN101323642A | 公开（公告）日： | 2008-12-17 |
| 发明（设计）人： | 李君文;郎婧;金敏;谌志强;王新为;陈照立;邱志刚;王景峰 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 30005*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 消减 免疫 法制 大肠杆菌 0157 h7 抗原 单克隆抗体 方法 | ||
1.消减免疫法制备大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)选取4-8周龄雌性BALB/c小鼠；
(2)用除大肠杆菌O157:H7以外的、已分离鉴定的、商品化的大肠杆菌为耐受原腹腔注射免疫所述BALB/c小鼠，分别在注射所述耐受原的6-16min、18-30h和40-60h，按每公斤所述BALB/c小鼠体重腹腔注射环磷酰胺50-150mg，用间接ELISA检测小鼠耐受情况；
(3)每隔两周重复步骤(2)，直至BALB/c小鼠对所述耐受原耐受；
(4)在使所述BALB/c小鼠出现耐受的末次免疫后的7-14d、14-21d、28-35d，以大肠杆菌O157:H7为免疫原腹腔注射免疫所述对耐受原耐受的BALB/c小鼠，在用所述大肠杆菌O157:H7末次免疫3d取鼠血检测效价，取与所述耐受原反应效价低而与大肠杆菌O157:H7反应效价高的小鼠按照常规杂交瘤技术制备大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体。
2.根据权利要求所述消减免疫法制备大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的方法，其特征是所述步骤(1)为：选取5-6周龄雌性BALB/c小鼠。
3.根据权利要求所述消减免疫法制备大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的方法，其特征是所述步骤(2)为：用除大肠杆菌O157:H7以外的、已分离鉴定的、商品化的大肠杆菌为耐受原腹腔注射免疫所述BALB/c小鼠，分别在注射所述耐受原的8-12min、22-26h和46-50h，按每公斤所述BALB/c小鼠体重腹腔注射环磷酰胺50-150mg，用间接ELISA检测小鼠耐受情况。
4.根据权利要求1或3所述消减免疫法制备大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的方法，其特征是所述除大肠杆菌O157:H7以外的、已分离鉴定的、商品化的大肠杆菌为大肠杆菌44752、大肠杆菌44186、大肠杆菌44824、大肠杆菌44336或大肠杆菌44102
5.根据权利要求1所述消减免疫法制备大肠杆菌O157:H7抗原单克隆抗体的方法，其特征是所述步骤(4)为：在使所述BALB/c小鼠出现耐受的末次免疫后的9-11d、16-18d、30-32d，以大肠杆菌O157:H7为免疫原腹腔注射免疫所述对耐受原耐受的BALB/c小鼠，在用所述大肠杆菌O157:H7末次免疫3d取鼠血检测效价，取与所述耐受原反应效价低而与大肠杆菌O157:H7反应效价高的小鼠按照常规杂交瘤技术制备大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体。
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