[发明专利]利用废葡萄糖母液制备结冷胶的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵和提取，具体的说是一种利用废葡萄糖母液制备结冷胶的方法。

背景技术

目前结冷胶的制备是采用将生产菌种接种于以淀粉为主要碳源的无菌培养基中进行发酵，发酵过程是在规定的温度、pH条件下进行需氧发酵，生产菌种选用少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)，对发酵终产物进行提取得到结冷胶。上述现有技术存在着浪费大量的粮食资源、制造成本高、不符合国家的产业政策等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用工业废料——废葡萄糖母液制备结冷胶的方法，以实现解决了废葡萄糖母液的废弃给环境带来严重污染、降低生产成本的目的。

本发明的整体技术构思是：

利用废葡萄糖母液制备结冷胶的方法，该方法包括如下工艺步骤：

A、将斜面菌种经扩大培养制成种子液；

B、将A步骤中制备的种子液按种子液：发酵培养基为10％-30％的接种量接入发酵培养基进行发酵，其中发酵培养基包括下列质量份的组分：

废葡萄糖母液3％-5％  大豆蛋白粉0.1％-0.3％    酶解棉籽蛋白0.1％-0.4％

大豆粉0.1％-0.3％    磷酸氢二钠0.05％-0.25％  豆油0.05％-0.2％

聚醚消泡剂0.05％-0.15％

发酵过程中的工艺条件为：

10小时内：温度30±3℃，压力0.03-0.05MPa，pH值7.2-7.4，通风0.2-0.4vvm；

10-20小时：温度30±3℃，压力0.03-0.05MPa，pH值7.0-7.2，通风0.4-0.6vvm；

20-30小时：温度30±3℃，压力0.03-0.05MPa，pH值7.3-7.5，通风0.6-0.8vvm；

30-40小时：温度30±3℃，压力0.03-0.05MPa，pH值7.3-7.5，通风0.6-0.8vvm，35-40小时补入碳源、氮源；该碳源、氮源的选用与发酵培养基中的碳源、氮源相同。

为促进菌种的生长，快速稳定合成结冷胶，控制菌种代谢过程中基质的碳氮比为20∶1；

为有效控制结冷胶菌种代谢环境，40-50小时：温度30±3℃，压力0.03-0.05MPa，通风0.6-0.8vvm，加入氨水或1％-3％弱碱使pH值7.2-7.5；其中优选氨水。

50-60小时：温度30±3℃，压力0.03-0.05MPa，通风0.2-0.4vvm；得到粘度不低于4500cp，固含量≥1.5％的发酵液；

斜面菌种选用少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)；

C、将发酵完成后的发酵液经预处理、深层处理、萃取、分离、洗涤、干燥、粉碎后即得结冷胶。

本发明的各工艺步骤中的具体工艺条件是：

A步骤中斜面菌种经扩大培养制成种子液包括将斜面菌种制备成摇瓶种子、将摇瓶种子制成一级种子、将一级种子制成二级种子，其中摇瓶种子的制备的工艺条件如下：

摇瓶种子培养液的包括如下质量份的组分：

废葡萄糖母液0.5％-1.5％  葡萄糖0.5％-1.5％    酵母膏0.1％-0.3％

蛋白胨0.1％-0.3％        牛肉膏0.2％-0.3％    NaCl 0.15％-0.3％

生物素1-3ppm

摇瓶种子培养液的灭菌条件：蒸汽压力0.1-0.14Mpa、温度121-125℃、时间30-35分钟；摇瓶种子的制备过程为：将接种针挑取一环斜面菌种中的原菌接入灭菌后的摇瓶种子培养液中，培养温度为28-32℃、转速为150-200转/分钟，培养周期为14-20小时振荡培养。

将摇瓶种子制成一级种子的工艺条件如下：

一级种子培养液包括如下质量份的组分：

废葡萄糖母液1％-2％  大豆蛋白粉0.2％-0.4％    蛋白胨0.2％-0.4％

硝酸钠0.1％-0.3％    磷酸氢二铵0.05％-0.25％  豆油0.06％-0.2％

一级种子培养液的灭菌条件：温度121-125℃、蒸汽压力0.1-0.14Mpa、时间30-35分钟；

一级种子的制备过程为：将摇瓶种子按照接种量为1％-3.5％接入灭菌后的一级种子培养液中，培养温度为27-33℃、培养周期为15-22小时，当OD值大于3.5时将一级种子接入二级种子培养液。

将一级种子制成二级种子的工艺条件如下：

二级种子培养液包括如下质量份的组分：