[发明专利]一种检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的方法及其试剂盒。

背景技术

随着经济的发展和物质生活水平的提高，人们对畜产品质量的要求越来越高，对鸡蛋的需求已经不再仅限于数量，对品质风味也有了更高的要求。通常饲料含鱼粉会导致鸡只产出鱼腥味蛋，然而用不含鱼粉的饲料喂养，仍然有部分鸡只产鱼腥味蛋。由于必需打开鸡蛋才能判断其是否有鱼腥味，造成了养禽生产者和加工者很大的经济损失。因此，研究鸡蛋鱼腥味的产生机理并通过育种手段剔除它，具有非常重大的经济意义和社会意义。

根据Bolton等(1976)研究发现，鸡只产鱼腥味蛋的性状为常染色体隐性遗传，传统育种方法很难剔除突变基因。随着分子生物学技术和鸡基因组研究的飞快发展，育种更准确、进展更快的分子育种已经提上历史舞台，从分子生物学角度研究鱼腥味产生的机理，并研究候选基因和分子遗传标记，运用标记辅助选择的方法可以快速、高效的达到育种的目的。

某些食物中含有三甲胺，如油菜籽，三甲胺挥发可产生很难闻的鱼腥味。含黄素单氧化酶3(flavin-containing mono-oxygenase3，FMO3)主要存在于肝脏中，其功能为促进食物中的三甲胺氧化成没有气味的N-氧化三甲胺，FMO3基因突变个体不能氧化机体从食物中摄入的三甲胺，从而导致三甲胺沉积，发生鱼腥味。有研究发现，人类和奶牛的FMO3基因突变均可导致鱼腥味的发生(Treacy，et al.1998；Akerman et al.1999；Lundén et al.2002)。FMO3基因突变的鸡只，由于不能氧化从食物中摄入的三甲胺，会导致三甲胺沉积到蛋黄中，产出鱼腥味蛋。Honkatukia等(2005)已经成功克隆了鸡的FMO3基因，该基因位于鸡8号染色体上，FMO3的cDNA全长1882bp，含9个外显子，共编码531个氨基酸残基(GenBank Accession NumberAJ431390)。

SNP(single nucleotide polymophism)，即单核苷酸多态，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态。目前已有很多成熟的技术检测SNP，如单链构象多态性(PCR-SSCP)、DNA测序、限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)、等位基因特异寡聚核苷酸杂交、DNA芯片及TaqMan等。PCR-SSCP方法最为常用，但存在的问题有：检测步骤较多；耗时较长(12-20小时)；易出现杂带，增加错判几率，结果的可信度较低。DNA测序、等位基因特异寡聚核苷酸杂交、DNA芯片和TaqMan方法虽然准确度都比较高，但检测费用高，运用到实际育种比较困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的方法。

本发明所提供的检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的方法，是PCR扩增包括GenBank Accession Number AJ431390的自5′末端第1034位脱氧核糖核苷酸在内的片段，用限制性核酸内切酶BsrI酶切所得的PCR扩增产物，电泳检测所得到的酶切产物，按照如下方法确定待测鸡只的GenBank Accession Number AJ431390的自5′末端第1034位脱氧核糖核苷酸是野生型A还是突变型T：如果电泳显示为两条带，所述待测鸡只的基因型为AA，是野生型纯合体；如果电泳显示为一条带，所述待测鸡只的基因型为TT，是突变型纯合体；如果电泳显示为三条带，所述待测鸡只的基因型为AT，是杂合体。

上述检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的方法，具体可为：用序列是序列表中的序列1和序列是序列表中的序列2组成的一对引物进行PCR。

上述检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的方法，具体可为：以所述待测鸡只的基因组DNA为模板，用序列是序列表中的序列1和序列是序列表中的序列2组成的一对引物进行PCR，用限制性核酸内切酶BsrI酶切所得的PCR扩增产物，按照如下方法确定待测鸡只的GenBank Accession Number AJ431390的自5′末端第1034位脱氧核糖核苷酸是野生型A还是突变型T：如酶切产物为143bp和226bp两个片段，所述待测鸡只的基因型为AA，是野生型纯合体；如酶切产物为369bp一个片段，所述待测鸡只的基因型为TT，是突变型纯合体；如酶切产物为143bp、226bp及369bp三个片段，所述待测鸡只的基因型为AT，是杂合体。

本发明的另一个目的是提供一种检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的试剂盒。