[发明专利]组织工程用软骨细胞外基质三维多孔海绵支架及其制备方法

权利要求书

1.一种天然软骨制成的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，通过将天然软骨 通过成微丝处理、去细胞处理和固化或固化后再强化处理得到；

所述成微丝处理是在蛋白酶抑制剂存在的条件下通过物理打碎的方式对天然 软骨进行成微丝处理；

所述去细胞处理通过化学去细胞处理的方法进行。

2.如权利要求1所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中所用天然软 骨来自人或其它哺乳动物。

3.如权利要求1或2所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中所述成 微丝处理的温度在0-10℃；

和/或

其中所述去细胞处理，还包括将经成微丝处理所得的软骨微丝进行离心分离。

4.如权利要求3所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述成微丝处理 的温度是4℃。

5.如权利要求3所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述离心分离是 差速离心梯度分离，以得到具有理想尺寸的软骨微丝。

6.如权利要求1所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中，所述化学 去细胞处理使用以下方法中的一种或多种组合进行：离子去垢剂脱细胞法、非离 子去垢剂脱细胞法、双性离子去细胞法、酶脱细胞法、高渗或低渗溶液脱细胞法、 酸或碱性溶液脱细胞法、磷酸三正丁酯(TBP)脱细胞法、敖合剂脱细胞法。

7.如权利要求6所述的的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中所述去细 胞处理为，在4℃下将软骨微丝加入0.5～2％Triton X-100Tris-HCL缓冲液，缓冲 液内含有蛋白酶抑制剂，持续振荡24～72h去除细胞。

8.如权利要求7所述的的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述Tris-HCL 缓冲液的pH为7.5，所述蛋白酶抑制剂为PMSF。

9.如权利要求1所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中所述固化处 理通过冷冻冻干或电纺丝技术进行。

10.如权利要求1所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中所述强化 处理通过物理强化方法或化学强化方法或其组合进行。

11.如权利要求1所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中所述强化 处理通过物理强化方法和化学强化方法的组合进行。

12.如权利要求10所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，其中所述的物 理强化方法使用真空干热物理方法交联或使用紫外线交联方法；

和/或

其中所述化学强化方法通过化学交联进行。

13.如权利要求12所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述化学交联 的交联剂使用醛类化合物、碳化二亚胺类化合物和碳化二亚胺类化合物与N-羟基 琥珀酰亚胺的混合物。

14.如权利要求13所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述醛类化合 物为甲醛或戊二醛，其水溶液浓度为0.01％～2.5％。

15.如权利要求14所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述甲醛或戊 二醛水溶液的浓度为0.05～0.25％。

16.如权利要求13所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述碳化二亚 胺类化合物为1-乙基-3，3-二甲基胺丙基-碳化二亚胺，其水溶液或者是乙醇溶液浓 度为0.001～1M。

17.如权利要求16所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述1-乙基-3，3- 二甲基胺丙基-碳化二亚胺水溶液或者是乙醇溶液的浓度为0.01～0.3M。

18.如权利要求13所述的软骨细胞外基质三维多孔海绵支架，所述交联剂为 碳化二亚胺类化合物与N-羟基琥珀酰亚胺的混合物，其水溶液或乙醇溶液中：碳 化二亚胺类化合物的浓度为0.001～1M；N-羟基琥珀酰亚胺的浓度为0.001～1M。