[发明专利]编码IER5的SiRNA的DNA序列及其载体和应用

说明书

技术领域

本发明属于医药基因工程领域，具体地说涉及编码特异性沉默IER5基因的SiRNA的DNA序列及其载体和应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导的细胞内mRNA发生特异性降解，从而导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型的缺失现象。RNAi是一种从低等生物到哺乳动物都有的保守的防御机制。双链RNA在细胞内被Dicer切成约19-22nt的小片段干扰RNA(SiRNA)进而形成SiRNA-蛋白复合物(SiRNP)，SiRNA通过识别、降解具有同源序列的mRNA最终导致特异性的基因表达沉默(gene silencing)〔Liu JY等.J.Section GenetForeign Med Sci，2004；27(1)：4-10.〕。因此，RNA干扰技术近年来日益受到人们的重视。SiRNA技术正在逐步应用在基因功能研究、细胞信号转导途径分析、冗余基因的确定、药物开发中靶标验证、基因治疗、病毒感染、癌症和显性遗传病治疗等都有广泛的用途。

目前治疗肿瘤的方法主要有三种，分别为外科手术、化疗与放射治疗，其中放射治疗约占这些肿瘤治疗的27％左右。细胞的辐射效应与细胞的辐射敏感性和临床上肿瘤放射治疗有关。在临床上，辐射敏感性已成为提高肿瘤放疗效果的一个重要因素，这种辐射敏感性与辐射敏感基因有关。与辐射有关的早期反应基因IER5(Immediate Early Response 5，简称为IER5，中文名称为早期反应基因5)，人的该基因位于1号染色体上1q25.3处，全长2369bp；而鼠的该基因也是位于1号染色体上181.5CM处，长度为2123bp。目前有关IER5的研究主要有：IER5基因序列(Williams M等.Genomics，1999，55：327-334)、在睡眠与清醒状态下在大脑中IER5基因表达(Cirelli C等.Brain research，2000，885：303-321)、辐射对IER5基因表达的影响(Tunde E等.InternationalJournal of radiation oncology biology and physics，2006：1506-1514.；Tachiiri S等.International Journal of Radiation Oncology Biology andPhycics，2006，64：272-279)等。Long XH等研究发现辐射后IER5基因有高表达现象(Long XH等.Int J Mol Med.2007 Apr；19(4)：607-15)。说明IER5有可能与辐射敏感性有关，这种敏感性可用于对耐肿瘤辐射敏感药物的开发。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供编码特异性沉默IER5基因的SiRNA的DNA。

本发明的第二个目的在于提供一种含有能稳定表达上述DNA的载体，优选地，载体是Psilencer^TM 3.1-H1 hygro-SiRNA。

本发明的第三个目的在于提供含有上述载体的宿主细胞，优选地，宿主细胞是HeLa，更优选地，宿主细胞是IER5-SiRNA-HeLa，其已于2008年1月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.2338。

本发明的第四个目的在于提供一种提高肿瘤细胞辐射抗性的组合物，其含有上述编码SiRNA的DNA、含有上述DNA的载体以及含有该载体的宿主细胞，优选地，组合物是药物组合物。

本发明的第五个目的在于提供上述编码SiRNA的DNA、含有上述DNA的载体以及含有该载体的宿主细胞在制备提高肿瘤细胞的辐射抗性药物中的应用，优选地肿瘤细胞是宫颈癌细胞。

本发明的第六个目的在于提供上述编码SiRNA的DNA、含有上述DNA的载体以及含有该载体的宿主细胞在制备治疗肿瘤药物中的应用，优选地肿瘤是宫颈癌。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种编码特异性沉默IER5基因的SiRNA的DNA，所述DNA的核苷酸序列是选自下列(a)或(b)的核苷酸序列：

(a)IER5-27：

正义链：5’-GATCCGCCTCATCAGCATCTTCGGTTTCAAGAGAACCGAAGATGCTGATGAGGTTTTTTGGAAA-3’(SEQ ID No.1)；