[发明专利]南极海洋芽孢杆菌n2a高产低温过氧化氢酶分离纯化方法

权利要求书

1.一种南极海洋芽孢杆菌n2a高产低温过氧化氢酶分离纯化方法，其特征在于包括下列步骤：

①将南极海洋芽孢杆菌n2a置于含有培养基的摇瓶中，于20-30℃，在摇床上培养至指数生长期晚期，后于0-10℃离心收集菌体；

②将步骤①收集菌体悬于三羟甲基氨基甲烷HCl，pH7.5的缓冲液A中进行超声破碎，在0-4℃离心取上清液；

③取步骤②的上清液中加入硫酸铵至40％饱和度，于0-4℃离心收上清液，再加硫酸铵至70％饱和度，于0-4℃离心收沉淀；

④将步骤③的沉淀对缓冲液A透析过夜，离心取上清液，上阴离子交换柱，室温下用安玛西亚AKTA FPLC装置以0.5-2.0m/分流速的缓冲液A平衡柱，再以0-0.3mol/L NaCl梯度洗脱收集活性组分；后用聚乙二醇2000浓缩后上柱，后用含0.15mol/L NaCl缓冲液A平衡洗脱，收集活性组分，聚乙二醇2000浓缩，得电泳纯低温过氧化氢酶。

2.根据权利要求1的低温过氧化氢酶分离纯化方法，其特征在于所述培养基为海水培养基或每升蒸馏水含8克蛋白胨，5克NaCl和3克酵母浸膏培养基，pH6-10；所述阴离子交换柱为DEAE-sephadexA25阴离子交换柱，所述流速为1ml/分钟，所述聚乙二醇2000浓缩后上柱为Sepnacry/S200HR安玛西亚XK16/70柱。