[发明专利]石斛属的快繁与离体保存方法

权利要求书

1.石斛属的快繁与离体保存方法，其特征在于：

(1)取石斛属果实内种子或茎尖或带腋芽的幼茎，果在纯乙醇中沾一下，然后在酒精灯火焰上燃烧然后用于接种；茎尖或幼茎在70％乙醇中浸一下，投入0.2％升汞8min，无菌水冲洗干净后接种在培养基中，待种子萌发或茎尖和幼茎长成拟原球茎，进行继代培养大量增殖，然后将原球茎放在分化芽的培养基上，待芽条高2-3cm时转入生根培养基，长成具根和4-5片叶的试管苗；

(2)选择石斛属培养物即3个不同发育阶段的培养材料也就是由石斛属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎或茎尖和茎基部形成的拟原球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛芽，由丛芽分化产生的具根和4-5片叶的试管苗，在培养基为1/2MS+NAA1mg.L^-1+S2％，温度为15-20℃中进行离体保存。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

(1)取野外采集或杂交授粉所结的果实，完整的果实在酒精灯燃烧灭菌后，在无菌条件下将果皮打开，将种子播种在花宝1号(N∶P∶K＝7∶6∶19)3g.L^-1的琼脂培养基上；开裂果，用尼龙布包裹散落种子，在0.2％Hgcl₂中消毒6-8min，无菌水冲洗干净后播种在花宝1号(N∶P∶K＝7∶6∶19)3g.L^-1的琼脂培养基上；未成熟的果内种子播种在花宝1号3g.L^-1+NAA1mg.L^-1的琼脂培养基上，培养室温度25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，光照12h/d，培养基PH为5，培养8-12天种子由黄色转绿，呈球形增大，基部有丝状毛的原球茎，继代培养在1/2MS+NAA1+土豆泥3％+香蕉泥15％的琼脂培养基上，30天后，分化出1cm小芽和0.5cm丛芽，又经过1-2个月的培养可得到高约2-3cm芽条，转入1/2MS+NAA1+土豆泥3％+香蕉泥15％的生根壮苗培养基培养1个月后加强光照至4000Lx以上，培养一个月，长成具根和4-5片叶试管苗；

(2)选择石斛属培养物即3个不同发育阶段的培养材料也就是由石斛属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎或茎尖和茎基部形成的拟原球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛芽，由丛芽分化产生的具根和4-5片叶的试管苗，在培养基为1/2MS+NAA1mg.L^-1+S2％，温度为15-20℃中进行离体保存。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于将野外采集到的石斛属茎尖或带腋芽的幼茎切段灭菌后接种在1/2MS+NAA1mg.L^-1+土豆泥3％+香蕉泥15％的琼脂培养基上，培养室温度保持为25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，光照12h/d，培养基PH为5，培养30-60天，腋芽处可抽生新枝，新枝可切割重复培养，茎尖抽生新枝短呈丛芽状，在上述培养基上继续培养，长成完整试管苗供移栽；也可接种在1/2MS或1/2MS+BA0.5+NAA0.2的琼脂培养基上，外植体基部可分化出大量拟原球茎，拟原球茎在1/2MS+NAA1+土豆泥3％+香蕉泥15％的琼脂培养基上培养30天后，分化出1cm小芽和0.5cm丛芽，又经过1-2个月的培养可得到高2-3cm芽条，再转入1/2MS+NAA1+土豆泥3％+香蕉泥15％的生根壮苗培养基培养1个月，此时光照加强至4000Lx，长成具根和4-5片叶试管苗；

(2)选择石斛属培养物即3个不同发育阶段的培养材料也就是由石斛属种子萌发后产生的胚性组织即原球茎或茎尖和茎基部形成的拟原球茎，由原球茎或拟原球茎分化产生的丛芽，由丛芽分化产生的具根和4-5片叶的试管苗，在培养基为1/2MS+NAA1mg.L^-1+S2％，温度为15-20℃中进行离体保存。

4.如权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于所述石斛种类优选长苏石斛Dendrobium brymerianum或球花石斛D.chysiflorum或鼓槌石斛D.chrysotoxume或铁皮石斛D.candidum或金钗石斛杂种选系D.phalaenosis×D.nobile或短棒石斛D.capillipes或兜唇石斛D.aphyllum或束花石斛D.chrysanthum或玫瑰石斛D.crepidatum或叠鞘石斛D.aurantiacum var.deuneanum或密花石斛D.densiflorum流苏石斛D.fimbriatum或棒节石斛D.findlayanum美花石斛D.loddigesii或金钗石斛D.aobile或长距石斛D.longicorum或报春石斛D.primulinum或大苞鞘石斛D.wardianum或霍山石斛D.huoshanense或齿瓣石斛D.devonianum或矮石斛D.bellatulum或串珠石斛D.falooneri或疏花石斛D.henryi或细茎石斛D.moniliforme或黑毛石斛D.williamsonii或喉红石斛D.christyanum或晶帽石斛D.crystallimun或杯鞘石斛D.gratiotissimum或小黄花石斛D.jenkinsii或苏唇石斛D.harveyanum或梳唇石斛D.strongylanthum或尖刀唇石斛D.heterocarpum或喇叭唇石斛D.lieniflorum或翅梗石斛D.trigonopus或草石斛D.compactum或秋石斛D.phalaenosis或石斛属一种Dendrobium.sp.或叉唇石斛D.stuposum或勐海石斛D.minutiflorum或肿节石斛D.pendulum。