[发明专利]姚虻唾液腺免疫调节肽及其基因和应用

说明书

技术领域：

本发明提供一种姚虻唾液腺免疫调节肽及其基因和应用，属于生物医学技术领域。

背景技术：

免疫调节肽在其生理浓度、有盐和血清存在的条件下具有广泛的生物学活性，包括在先天性免疫细胞(嗜中性粒细胞、上皮细胞)中与炎症反应、先天性免疫和适应性免疫相关的活性，在单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞中作为先天性免疫和适应性免疫的沟通桥梁。抗菌肽可以中和G^-菌脂多糖、G⁺菌脂磷壁酸和细菌未甲基化CpG DNA等细菌信号分子。这些信号分子可以与宿主细胞表面Toll样受体结合，启动信号级联放大和细胞因子(如TNF-α、IL-6等)正调节。低浓度细菌信号分子可引发机体有益的炎症反应和发热，但是如果反应剧烈或持续时间延长，可以导致全身循环障碍、器官衰竭，甚至死亡。抗菌肽可抑制脂多糖与血清脂多糖结合蛋白因子结合，防止内毒素血症和死亡。免疫调节肽还参与宿主天然免疫的其他反应，比如，通过有丝分裂原激活的蛋白激酶信号通路或是其它信号通路提高单核趋化蛋白的水平来刺激单核细胞和嗜中性白细胞的趋化作用、促进肥大细胞组织胺的释放、抑制组织蛋白酶以及促进创伤愈合。

细胞因子是一类主要由免疫细胞和相关细胞产生的高活性、多功能小分子蛋白质。细胞因子的产生细胞非常广泛，除淋巴细胞、单核/巨噬细胞可产生多种细胞因子外，粘膜上皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等多种细胞也能产生。通常休止期细胞不产生或仅自发产生少量的细胞因子，当受抗原、丝裂原或其他激活剂激活后可大量产生一定种类的细胞因子。细胞因子通过与靶细胞表面的相应受体结合后发挥生物学功能。由于细胞因子与其受体间具有很高的亲和力，因此极微量细胞因子就能产生明显的生物学效应。一般根据细胞因子的名称和生物学活性可分为主要起免疫调节作用的白细胞介素、有抗病毒作用的干扰素、能刺激骨髓造血前体细胞生长和分化的集落刺激因子、有一定抗肿瘤活性并有明显炎症介质作用的肿瘤坏死因子、能刺激细胞生长的生长因子以及对免疫细胞有趋化作用的趋化性细胞因子等六类。

细胞因子的异常表达，常与临床上许多疾病的发生有密切的关联。一方面，细胞因子表达过高、过低或缺陷，均会导致与机体免疫有关疾病的发生；另一方面，伴随着临床上许多疾病进程，某些细胞因子的表达量也会出现明显的变化。

虻科昆虫俗称牛虻，属于吸血节肢动物，其寄生成功的关键是通过产生特异唾液拮抗剂来影响宿主免疫反应。根据国内外文献报道，这些物质存在显著的生化和药理学多样性，其天然多样性用在药物治疗和生化研究中将有很好前景，同时也对于扩展我们对宿主保护机制性机制的理解以及对唾液产品和先天性免疫间作用的研究。

经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。

发明内容：

本发明的目的是基于上述技术和理论基础，提供一种具有免疫调节活性，如抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)、单核趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-10(IL-10)的姚虻唾液腺免疫调节多肽及其基因和应用。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案：

姚虻唾液腺免疫调节多肽：

姚虻唾液腺免疫调节肽是中国虻科昆虫唾液腺免疫调节肽基因编码的一种线状多肽，其全序列为：甘氨酸-甘氨酸-缬氨酸-丝氨酸-甘氨酸-缬氨酸-丝氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-谷氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-缬氨酸-丝氨酸-甘氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-天冬酰胺-丝氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-赖氨酸-丙氨酸

姚虻唾液腺免疫调节肽基因的克隆包括：姚虻唾液腺总RNA提取，mRNA纯化，mRNA反转录及cDNA文库构建，设计引物，利用PCR方法筛选免疫调节肽基因。扩增引物长度为25个核苷酸，其序列为5’CTCATTGTGGGACTGTTTACATCAT3’，PCR另一扩增引物为CLONTECH公司SMART^TM cDNA Library ConstructionKit中的3’PCR Primer引物，其序列为5′ATTCTACAGGCCGAGGCGGCCGACATG 3′。所获阳性单克隆进行基因核苷酸序列测定。

基因测序结果表明编码姚虻唾液腺免疫调节多肽的基因由362个核苷酸组成，自5’端至3’端序列为：

atgttgttaa aaagttacgt tttcttttta ttgagcctgc tcattgtggg actgtttaca  60