[发明专利]茶尺蠖反转录转座子基因rtp及其用途

说明书

技术领域

本发明属于昆虫基因工程领域。具体的说，本发明涉及一种茶尺蠖反转录转座子(retrotransposon，rtp)基因分离和分析；还涉及利用该基因进行调节茶尺蠖对病毒抵御能力。

背景技术

茶尺蠖是主要茶园虫害之一，因此也是重要的防治对象。随着茶园管理的无公害化和有机化，化学合成农药的使用受到限制或禁止，而生物农药则成为大力推广的制剂。核型多角体病毒(NPV)是常用防治茶尺蠖的生物农药。研究显示，NPV对幼龄茶尺蠖有较好防效，但对3龄以上幼虫作用较小。高龄茶尺蠖对NPV产生抗性的原因的探索，将有助于该生物农药的合理、高效使用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种茶尺蠖反转录转座子基因rtp以及该基因编码的蛋白质，该基因物的活性与不同龄期茶尺蠖害虫的抗病毒性能密切相关，可用于明确不同龄期茶尺蠖对NPV的耐受性原因。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种茶尺蠖反转录转座子基因rtp，其具有SEQ IDNo：1所示的核苷酸序列。

本发明还同时提供了上述基因rtp编码的蛋白质，其具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

本发明还同时提供了上述基因rtp的用途，利用该基因物调节鳞翅目害虫的抗病毒性能。

作为本发明基因rtp用途的改进：病毒为核型多角体病毒。

作为本发明基因rtp用途的进一步改进：鳞翅目害虫为茶尺蠖。

作为本发明基因rtp用途的进一步改进：将根据SEQ ID No：1所示的核苷酸序列设计的rtp siRNA注射入茶尺蠖体内，使内源rtp表达下调，达到茶尺蠖抗病毒能力下降。

本发明通过分子生物学技术手段分离和分析与鳞翅目害虫抗病毒性能密切相关的基因，为鳞翅目害虫NPV等生物农药的增强剂的研发奠定基础。本发明是采用cDNA-AFLP和RT-PCR技术分离茶尺蠖等鳞翅目害虫与抗病毒性能有密切关系的基因rtp；证明rtp基因表达与鳞翅目害虫不同龄期的抗病毒能力密切相关。

实现本发明的具体技术步骤如下：

一、茶树鳞翅目害虫rtp基因分离和分析

分别取高、低不同龄期茶尺蠖幼虫若干头。以TRIZOL(Invitrogen公司)试剂提取总RNA，并以UNIQ-10柱式mRNA抽提纯化试剂盒(上海生工生物工程有限公司)分离mRNA。分别取1-5μg mRNA进行cDNA合成，双链cDNA合成采用TakaRa MMLV RTase cDNASynthesis Kit(宝生物工程[大连]有限公司)进行。双链cDNA经异丙醇沉淀纯化后，以TakaRaBspHI/BssHII(宝生物工程[大连]有限公司)组合酶切消化。消化后的片段与事先设计的2个接头SEQ ID No：3和SEQ ID No：4，以T4 DNA连接酶(上海生工生物工程有限公司)连接。以连接完成的cDNA片段为模板，以预扩增引物SEQ ID No：5和SEQ ID No：6进行PCR预扩增。将预扩增产物适当稀释后，以选择性扩增引物组合SEQ ID No：7和SEQ ID No：8，进行选择性扩增。扩增产物在6％变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分析，以核酸银染试剂盒(上海生工生物工程有限公司)进行显带。