[发明专利]一种抗生素生物农药及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种抗生素生物农药及其制备方法，属于微生物发酵工程技术领域。

背景技术：

病虫害每年给农业生产造成巨大损失，为了实现稳产高产，人们一直主要采用化学农药给予控制。化学农药具有防效高、速度快、杀虫抗菌谱广、成本低、使用简单等优点，因而得到了迅速发展，并成为防治病虫害夺取农业生产丰收的一个重要手段。据统计，我国近些年化学农药防治面积占总防治面积的比率高达95％左右。由于化学农药的长期、大量和反复使用，带来了对土壤、水体和大气的污染；农副产品中农药残留增加，也直接危害了人类健康；同时，害虫和病菌的抗药性不断加深和扩大，全世界至少已有500多种害虫对农药产生了抗性，有的害虫抗性高达几万倍；此外，化学农药在杀灭害虫的同时，也杀伤了天敌及其它有益生物，破坏了生态平衡，引起害虫更加猖獗。这样，不得不加大农药的施用量和频度，从而造成化学农药应用的恶性循环。我国是属于人地关系非常紧张的地区，其出路在于大力发展生物农药。

发明目的：

本发明的目的是要克服现有技术缺陷，提供一种新的生物农药，代替现有化学农药用于防治红蜘蛛、蚜虫、菜青虫等作物害虫。

为实现上述目的采取的技术方案：

本发明的生物农药，其活性有效成份为农抗HA97502，分子式为C₂₅H₃₇0₄N，化学结构式为：

其制备采用阿布拉链霉菌HA97502(Streptomyces aburaviensis HA97502)为产生菌，通过微生物发酵培养技术生产。

本发明的具体内容：

1.产生菌鉴定：

(1)形态特征：菌株HA97502革兰氏染色阳性；在高氏合成1号琼脂和燕麦琼脂等培养基上生长7天后，基内菌丝发育良好，无横隔，不断裂，多分枝；气生菌丝生长丰富，分化形成孢子丝；孢子丝直至柔曲，孢子椭圆形，表面光滑。

(2)培养特征：菌株HA97502的培养特征见说明书附表1：

(3)细胞壁类型分析：菌株HA97502的全细胞水解液含有L，L-DAP(L，L-二氨基庚二酸Diaminopimelic acid)，无特征性糖；细胞壁属于I型，糖型C。

(4)生理生化特征：菌株的生理生化特征见说明书附表2。

(5)16S rDNA序列分析：菌株HA97502的16S rDNA序列见序列表：

与GenBank中相关序列Blast比较的结果表明，该菌株属于链霉菌属；与目前发表的相关菌株相比，菌株HA97502与阿布拉链霉菌(Streptomyces aburaviensis)的16S rDNA序列一致，同源性为100％。

根据形态特征、细胞壁组分和16S rDNA序列分析，菌株HA97502属于链霉菌属；其形态特征、16S rDNA序列和生理生化特征均与阿布拉链霉菌高度相似。故将菌株HA97502鉴定为阿布拉链霉菌(Streptomyces aburaviensis)。

2.有效成份鉴定：

(1)有效成份的提取分离：

发酵液经过滤、溶剂提取、硅胶柱层析分离及高效液相色谱纯化即得纯品。具体流程见说明书附图1。

(2)有效成份的结构论证：

农抗HA97502的紫外有三个吸收峰，λmax(in MeOH)为233、238和267nm，与杀粉蝶菌素A₁相似。农抗HA97502的氢核磁共振谱(¹HNMR)，基本骨架的杂环及直链部分与杀粉蝶菌素A₁一致，其区别主要在于支链甲基部分。农抗HA97502的¹HNMR谱有二个CH₃质子吸收峰的化学位移完全相同，均在1.74ppm处，且均为单峰，说明这二个CH₃与同一个烯碳相连，具体结构见下图。

3.制备工艺：

(1)生产菌种：

本发明所用的微生物菌种为阿布拉链霉菌HA97502(Streptomyces aburaviensisHA97502)，保藏于CGMCC(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心)，保藏号CGMCCNO.2297，保藏日期为2007年12月14日，保藏地址为北京市朝阳区大屯路。

(2)培养基：

①种子斜面培养基：