[发明专利]一种丁草胺降解菌及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌，尤其涉及一种丁草胺降解菌及应用。

背景技术

丁草胺因其杀草活性高，选择性强，可用于水田和旱地防除以种子萌发的禾本科杂草、一年生莎草和一些双子叶杂草(如稗草、异型莎草、牛毛毡和千金子等)，多年来一直是我国水稻田中使用面广、时间长、量大的一种除草剂。

丁草胺在我国农业生产上得到广泛应用的同时，它在环境中的残留引起环境污染问题也日趋严重：一方面，丁草胺随生产废水、排灌水和降水纵向淋溶、横向扩散，会造成地表水和地下水的污染；另一方面丁草胺对生态系统中的藻类、光合细菌、固氮细菌、产甲烷细菌、真菌、放线菌等产生影响，从而影到生态系统的正常运转。

研究表明丁草胺自然条件下挥发性小，不易水解，抗光解性能比较好，其在环境中的消失主要是由于微生物降解所致，因此寻找丁草胺的高效降解菌对于消除丁草胺的环境污染具有重要的现实意义。

发明内容

本发明提供了一种降解速度快、降解效率高的丁草胺降解菌。

一种丁草胺降解菌，经鉴定命名为施氏假单孢菌(Pseudomonasstutzeri)BD-1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2008年4月7日，保藏号为CCTCC No.M 208046。该菌株16S rDNA的Genbank登陆号为EU636773。

该菌株主要生物学特征为：革兰氏反应阴性，菌体杆状，极生单鞭毛，大小约为(0.5μm～1.0μm)×(2.0μm～3.0μm)，接触酶阳性，氧化酶阳性，能利用淀粉、糊精、吐温40、吐温80、葡萄糖、麦芽糖，不能利用蔗糖、D-半乳糖。

一种含有上述丁草胺降解菌的菌剂，该菌剂的制备方法就是将上述菌种与常规的附加剂混合均匀后制成水剂。

上述菌种可应用于水体丁草胺污染的防治。

本发明提供了一种丁草胺降解菌，该菌株对丁草胺降解效率高，降解速度快，可有效防治丁草胺在水体的污染。

附图说明

图1为本发明丁草胺降解菌对不同浓度的丁草胺的降解曲线图。

具体实施方式

培养基

无机盐培养基：MgSO₄·7H₂O 0.4g、FeSO₄·7H₂O 0.02g、K₂HPO₄0.2g、(NH₄)₂SO₄ 0.2g、CaSO₄ 0.08g、去离子水1000mL，混合搅拌均匀，调节pH值为7.0，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)制得。

普通培养基：牛肉膏10g、蛋白胨5.0g、氯化钠5.0g、琼脂20.0g、去离子水1000mL，混合搅拌均匀，调节pH值为7.0，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)制得。

菌种分离纯化

(1)取浙江大学华家池校区蔬菜所菜地土壤5g置于250mL三角瓶中，加入50mL无机盐培养基，添加丁草胺至浓度为50mg/L，置于摇床(30℃，160rpm)中振荡培养一周。取5mL悬液接种至含50mg/L丁草胺的无机盐培养基中置于摇床(30℃，160rpm)中培养一周，同样条件培养3次(丁草胺含量依次为100、200和300mg/L)，每次培养均取前一次的培养液作为接种液。将最后一次获得的培养液全部接种于膜生物反应器中并向其中加入丁草胺生产废水，启动反应器，考察反应器对丁草胺生产废水的处理效果。

(2)从浙江大学农药与环境毒理研究所正在运行的膜生物反应器中取活性污泥1g置于100mL三角瓶中，加入20mL无机盐培养基，添加丁草胺至浓度为50mg/L，置于摇床(30℃，160rpm)中振荡培养一周。

(3)取上层浊液一环接种于含50mg/L丁草胺的无机盐培养基中，置于摇床(30℃，160rpm)中培养一周；同样条件再培养2次(丁草胺量依次为100和200mg/L)，每次培养均取前一次的培养液作为接种液。

(4)将最后一次获得的培养液稀释(10^-5)后于含100mg/L丁草胺的普通培养基划线分离筛选，挑取单菌落接种于含100mg/L丁草胺的无机盐培养基中，置于摇床(30℃，160rpm)中振荡培养，观察菌的生长并测定丁草胺的降解情况。重复上述过程纯化6次，选取能在含丁草胺的无机盐培养基中生长并且能快速降解丁草胺的单菌落进行鉴定。菌种保存于斜面培养基上，所用培养基为普通培养基。

鉴定命名