[发明专利]一种螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白基因及其编码蛋白无效
| 申请号： | 200810061424.3 | 申请日： | 2008-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN101358194A | 公开（公告）日： | 2009-02-04 |
| 发明（设计）人： | 于平;励建荣;陆伟宏;唐云平 | 申请（专利权）人： | 浙江工商大学 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C07K14/405;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 | 代理人： | 徐关寿 |
| 地址： | 310035*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 螺旋藻 蛋白 亚基全 基因 及其 编码 | ||
1.一种螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)获得螺旋藻藻胆蛋白α亚基质粒：从新鲜藻泥中提取螺旋藻基因组DNA，以其为模板，用PCR扩增出螺旋藻藻胆蛋白α亚基基因的核苷酸序列；将该基因连接到pMD19-T Simple Vector上，将其转化到大肠杆菌DH5α，提取质粒pMD19-cpcA，经BamHI和SacI酶切得到脱辅基藻胆蛋白α亚基基因，与经同样双酶切的表达质粒pETDuet-1连接得到pETDuet-2；
(b)构建螺旋藻藻胆蛋白α亚基、裂合酶E表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出裂合酶E基因，扩增片断经SacI和SalI酶切后，将裂合酶E基因连接到经同样双酶切的pETDuet-2上，得到表达载体pETDuet-3；
(c)构建螺旋藻藻胆蛋白α亚基、裂合酶E/F表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出裂合酶F基因，扩增片断经SalI和NotI酶切后，将裂合酶F基因连接到经同样双酶切的pETDuet-3上，得到表达载体pETDuet-4；
(d)构建藻胆蛋白α亚基、裂合酶E/F、血红素氧化酶表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出血红素氧化酶基因hox1，扩增片断经NdeI和BglII酶切后，将血红素氧化酶基因连接到经同样双酶切的pETDuet-4上，得到表达载体pETDuet-5；
(e)构建螺旋藻藻胆蛋白α亚基全蛋白表达载体：以螺旋藻基因组DNA为模板，用PCR扩增出藻胆素合成酶基因pcyA，扩增片断经BglII和KpnI酶切后，将藻胆素合成酶基因连接到经同样双酶切的pETDuet-5上，得到表达载体pETDuet-6。
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