[发明专利]中华蜜蜂MRJP1表达产物酶解制备抗高血压多肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中华蜜蜂MRJP1表达产物酶解制备抗高血压多肽的方法。

背景技术

血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽最早是Ferreira(1965)从美洲茅头腹蛇(Bothrops jararaca)蛇毒中发现的，Oshima等又从明胶的细菌胶原酶消化液中寻找到ACE抑制肽，而Cushman等则基于ACE键合部位假说模型开发出第一代ACEI抗高血压药Captopril，在临床治疗高血压中获得巨大成功。随后又开发出第二、三代化学合成的ACE抑制剂，如Lisinopril、Enalapril、Forsinopril等，这些降压药多数是短链肽的类似物。合成ACE抑制肽具有药效快而强的特点，但易损害肾功能，有一定副作用。因此，从天然食物蛋白中分离制备降血压多肽的研究得到国内外学者的高度重视，采用基因工程技术生产包含降血压多肽片段的蛋白，再经酶解制备降血压多肽是一条十分诱人的途径。

蜂王浆具有多种医疗保健和生物学功能。Takeshi(2001)研究报道王浆中的蛋白成分有强的抗氧化能力和清除活性氧的能力；Iwao(2003)报道王浆主蛋白之一——MRJP3在体内和体外具有潜在的调节免疫功能；Kamakura(2001)报道鲜王浆对小鼠有抗疲劳作用。Toshiro(2002)报道王浆蛋白胃肠酶酶解产物生物活性多肽及其在SHR中的抗高血压作用。Katsu(2004)报道经蛋白酶处理的王浆(ProRJ)和从中获得的多肽具有抑制血管紧张肽I-转化酶活性，给自发性高血压大鼠(SHR)口服ProRJ或多肽有抗高血压作用。蜜蜂MRJPs的基因克隆及其潜在功能研究越来越得到国内外学者的关注，已从西方蜜蜂中克隆出MRJP1、MRJP2、MRJP3s、MRJP4、MRJP5s、MRJP6、MRJP7、MRJP8等多个基因的cDNAs。

随着西方蜜蜂MRJPs研究的深入，蜂王浆主蛋白(MRJPs)的医疗保健功能被越来越多的试验结果所证实，最新研究认为王浆主蛋白因具有多种生物医药保健功能而重新命名为王浆活性蛋白(Apalbumins)，且对西方蜜蜂王浆活性蛋白1(Apalbumin1，原为MRJP1)的全长cDNA序列、4个亚克隆片段在大肠杆菌进行了表达，这5个表达产物的免疫调节功能研究结果表明，全长基因的表达产物和四个亚克隆表达产物与空白细胞对照组相比均具有显著的免疫调节效果，证实了王浆活性蛋白1具有免疫调节功能，且发现5’-端的第一个亚克隆表达产物的免疫调节功能比全长基因的表达产物更强，这是一个十分令人振奋的研究结果，为王浆活性蛋白基因表达的生物医药开发和产业化研究开拓新的研究领域和方向。

虽然东方、西方蜜蜂MRJPs家族的相当多基因已被克隆，部分基因在大肠杆菌中被表达，但对MRJPs各成员的确切的生物学功能尚未诠释。MRJP1、2、3、5是MRJPs基因家族的主要成员，已有研究表明MRJP1可能具有免疫调节、促进肝细胞生长和抗菌功能，王浆蛋白的酶解产物会产生丰富的抗高血压多肽。

利用先进的现代生物技术改造传统的食品工业和制造业已成为新的发展趋势。从新的生物资源中发现、开发对人类健康和疾病防治有重要作用的新基因，采用现代生物技术手段，把这些重要基因克隆、转移到其他经济生物中进行表达，从而达到利用这些新的基因资源为人类造福的目的。蜂王浆具有重要的医疗保健功能，其王浆蛋白被证明具有酶解产生多种降血压功能肽的作用，通过构建能酶解产生抗高血压多肽的高效表达基因，进而通过实现利用基因工程和发酵工程制备降血压功能肽，为高血压疾病的预防和治疗提供新的优质的医药资源和保健食品源；另一方面也可以把这些功能基因转移到食品工业微生物内，获得具有降血压功能的啤酒酵母或乳酸菌，在高科技食品工业上具有广阔的应用前景，将产生巨大的经济效益和社会效益。但至今还未见利用基因工程方法制备重组王浆蛋白酶解产生抗高血压的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种中华蜜蜂MRJP1表达产物酶解制备抗高血压多肽的方法。

本发明的中华蜜蜂MRJP1表达产物酶解制备抗高血压多肽的方法，步骤如下：

1)MRJP1基因的克隆