[发明专利]一种超临界CO2溶剂中的微生物诱变方法

权利要求书

1.一种超临界CO₂溶剂中的微生物诱变方法，其特征在于所述微生物诱变在超临界CO₂中进行。

2.如权利要求1所述的方法，所述方法包括：将微生物菌种接种至适合所述微生物菌种的液体培养基，培养至对数生长期，得到细胞数约为1.0×10⁸个的菌液；将菌液移入高压釜中，压入CO₂至釜内压强为8～12MPa，控制温度为30～45℃，恒温恒压保持20～60分钟后，缓慢释放CO₂，至釜内压力降至0.3MPa时，将菌液压入无菌容器中，进行筛选，选出成活菌株即为诱变的微生物菌株。

3.如权利要求1所述的方法，所述方法包括：将微生物菌种接种至适合所述微生物菌种的液体培养基，培养至对数生长期，得到细胞数约为1.0×10⁸个的菌液；将菌液移入高压釜中，按5～30g/L菌液的添加量加入有机物二甲亚砜或肼或丙酮或30％体积分数的双氧水，压入CO₂至釜内压强为8～12MPa，控制温度为30～45℃，恒温恒压保持20～60分钟后，缓慢释放CO₂，至釜内压力降至0.3MPa时，将菌液压入无菌容器中，进行筛选，选出成活菌株即为诱变的微生物菌株。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述微生物菌种为水生黄杆菌(Flavobacterium aquatile)，所述液体培养基按如下终浓度组成配制：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，NaOH调pH为7.5，溶剂为水。

5.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述微生物菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，所述液体培养基按如下终浓度组成配制：酵母膏0.3％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，葡萄糖1％，NaOH调pH为7.2，溶剂为水。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)液体培养基配制：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，NaOH调pH为7.5，溶剂为水，灭菌，接入水生黄杆菌，30℃、200r/min条件下培养至培养液中细胞浓度为1.0×10⁸个/mL，得菌液；

(2)将菌液转入高压釜中，按照5g/L菌液的添加量加入二甲亚砜，压入干冰级CO₂，至釜内压强为8MPa，控制温度为35℃，恒温恒压保持30分钟，然后缓慢释放CO₂，至高压釜内压强为0.3MPa时，将菌液压入无菌容器中，筛选出活菌，得到诱变的水生黄杆菌菌株。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)液体培养基配制：酵母膏0.3％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，葡萄糖1％，NaOH调pH为7.2，溶剂为水，灭菌，接入枯草芽孢杆菌，30℃、200r/min条件下培养至培养液中细胞浓度为1.0×10⁸个/mL，得菌液；

(2)将菌液转入高压釜中，按照10g/L菌液的添加量加入二甲亚砜，压入干冰级CO₂，至釜内压强为10MPa，控制温度为35℃，恒温恒压保持40分钟，然后缓慢释放CO₂，至高压釜内压强为0.3MPa时，将菌液压入无菌容器中，筛选出活菌，得到诱变的枯草芽孢杆菌菌株。