[发明专利]一种示踪食品致病性细菌生长的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及示踪细菌生长状况的快速检测技术领域，特别是多频大幅脉冲 智能化学分析系统在监测液体培养基中食源性致病菌生长情况的方法。

背景技术

近年来，食品致病性细菌引发的食物中毒等疾病受到社会高度关注。大肠 杆菌O157:H7(E.coli O157:H7)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus Aureus)、 鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)等被认为是几种危害最大的食源性致 病菌，它们不但造成了巨大的经济损失，也严重威胁到人类健康与安全。因此， 在食品生产、加工、储藏和销售等过程中，示踪食品致病性细菌生长状况及其 规律和有毒代谢产物产生规律的综合信息，对指导食品的安全生产和卫生检测 具有重要意义。

目前，所有示踪食品致病性细菌生长状况及其趋势的检测方法，包括传统 的国标法和其他的快速检测方法和新技术，都只能对菌体数量或对某一种成份 如ATP等含量的变化规律进行测定，不能反应菌体生长过程中对营养基质的消耗 状况、代谢变化规律的综合信息。因此，建立一种准确、灵敏、简便且经济的 示踪食品致病性细菌生长代谢状况综合信息的快速检测方法尤为重要。

菌种不同，自身所含酶系统不同，代谢方式和代谢途径就不相同，对营养 物质的分解利用和产生的产物亦不相同。即使是同一种菌体，乃至同株甚至克 隆菌体的不同生长时期，在同一个限定的环境中，对基质的利用程度和代谢产 物也是不尽相同的，利用多频大幅脉冲传感系统可以分析和示踪这些变化的综 合信息，并具有不受样品颜色、浊度的影响，样品可以不经处理，检测前后无 损耗，所用仪器设备相对简单等优点。

目前，有用免疫传感器、石英晶体压电传感器其他生物传感器监测食品微 生物的研究报道，这些方法均存在一些关键技术问题没有得到解决，从而限制 了其发展和应用。用高灵敏度的电子舌快速评价食品质量安全性是为国内外研 究的前沿，目前仅应用于检测食品和农产品中重金属污染、农药残留和产品真 伪辨识等领域。

智能化学分析系统(通常称作电子舌)，通过传感器阵列(相当于生物系统 中的舌头)感受不同的化学物质，采集各种不同的信号信息输入电脑。电脑代 替了生物系统中的大脑功能，通过软件进行分析处理，区分辨识不同性质物质 的整体特征。

专利申请号为200710068869.X的专利申请公开了一种用于液体样品的智能 化学分析系统，包括传感器阵列、信号激励采集装置和智能分析单元，信号激 励采集装置将预定的激发脉冲序列加到辅助电极，同时采集工作电极产生的响 应信号；智能分析单元包括信号激励采集装置上位机和数据智能分析软件，用 于对响应信号进行处理和分析；该智能化学分析系统的信号激励采集装置为多 频脉冲信号激励采集装置，能产生多频率段的大幅脉冲电势；它的动作步骤如 下：1.通过单片机控制DAC数/模转换模块，激励信号输入恒电位仪后加至辅助 电极；2.工作电极产生的电流由程控电流跟随器转换为电压信号，进入反相放大 器；3.由低通滤波去除信号中的噪声，输入ADC模/数转换模块转换成数字量反 馈给单片机。

由于该智能化学分析系统采用多频脉冲伏安法为信号激发采集模式，相比 现有技术响应信号强，信噪音比高，信息量更丰富；同时采用了适合其自身数 据结构特点使用的，方便、智能化的智能分析软件，具有响应信号强、信号稳 定，信噪音比高，信息量丰富、分辨率高、易于操作等特点。

利用该智能化学分析系统具有非专一性、弱选择性、对溶液中不同组分(有 机和无机，离子和非离子)具有高度交叉敏感的特性，对不同生长时期的菌群培 养液进行检测，结合适当的模式识别算法和多变量分析方法对阵列数据进行处 理，获得培养液样本定性定量信息，从而可以监测菌群的生长情况。

发明内容

本发明的目的在于提供一种准确、灵敏、简便、高效、经济的示踪食品致 病性细菌生长和代谢综合信息的检测方法，即一种用多频大幅脉冲智能化学分 析系统监测菌群生长的方法。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现的：

一种示踪食品致病性细菌生长的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

a.将待测菌种接种于1％葡萄糖肉汤培养基中，静止培养18小时，制备种子 液；