[发明专利]一株能产没食子酸的拟茎点霉菌

说明书

技术领域

一株能产没食子酸的拟茎点霉菌(Phomopsis sp.)，本发明涉及一株微生物菌株，属于生物工程技术领域。

背景技术

没食子酸(Gallic Acid，GA)又叫3、4、5-三羟基苯甲酸、五倍子。是从茶条槭(Acer ginnala Maxim)叶子中分离得到的天然产物，是一种可用于医药、化工等生产的原料。在医药工业中，没食子酸及其衍生物对冠心病、脑血栓、胃溃疡、抗菌、抗血吸虫、抗病毒性肝炎、老年性痴呆、抗肿瘤等显示出多方面的功效；在化工、轻工、食品等方面，没食子酸作为原料均有广泛的应用。

没食子酸主要从茶条槭叶子中提取，茶条槭在我国主要分布在东北山地、内蒙古及华北山地，长江流域也有生长，在黑龙江省主要分布在小兴安岭、完达山、张广才岭等山区。虽然分布很广，但是数量少、较星散、极少成林、且生长缓慢。由于长期掠夺式采叶方式已使茶条槭基因资源遭到了很大浪费和破坏，原料的质量和数量很难得到保证。

目前商业用没食子酸由茶条槭叶片提取法生产，此方法缺憾是树叶受季节限制，资源匮乏，每生产1g没食子酸，需800-1000kg叶子，要采摘几千棵大树，而且威胁植物生存，现今市场对没食子酸的需求量越来越大，仅黑龙江省每年就计划生产600吨，需茶条槭干叶7000吨左右，现在的研究还是运用常规的育种技术，因此没食子酸的原料保障就成为其是否能成功走向市场的最为关键因素。因而广辟生产途径，解决没食子酸资源贫乏问题变得十分迫切。

现将主要的研究集中在：合成、半合成、组织培养和真菌研究、栽培等方面。

迄今为止，化学家们对没食子酸合成通过单宁水解、酶法转化等手段来合成没食子酸，但是合成的成本过高，从生产的角度无实际意义，没食子酸作为多种产品的原料须从天然物中取得，所以对天然资源开发和生物工程利用处于没食子酸研究的核心地位。

用微生物方法来生产没食子酸，操作简便、容易控制、成本低。是最有应用前景的途径之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一株能产没食子酸的拟茎点霉菌，从而为没食子酸的微生物发酵法工业生产创造条件，保护环境的同时保护树种植物资源。

为了达到上述目的，本发明在分析国内外药用植物内生真菌研究结果的基础上，对茶条槭内生真菌进行了分离、鉴定及代谢产物分析，筛选出高产没食子酸的内生真菌----拟茎点霉属。

本发明所采用的技术方案是：取茶条槭茎段为外植体，经过表面消毒后培养、分离、纯化得到单一菌种。然后通过经典分类和分子生物学方法分类，确定其归属于拟茎点霉属(Phomopsis sp.)；发酵培养7天收集菌丝，最后用HPLC方法检测代谢物，证明该菌种含有没食子酸。

该微生物菌株的rRNA转录间区(internal transcribedspacer，ITS)，序列片段506bp，序列为：

ACGCGCCCCA GGCGCACCCA GAAACCCTTT GTGAACTTAT ACCTTACTGT   50

TGCCTCGGCG CTAGCTGGTC CTCCGGGGCC CCTCCTTCTG GAGGAGCAGG  100

CACGCCGGCG GCCAACCCAA CTCTTGTTTT TACACTGAAA CTCTGAGCAC  150

AAAACATAAA TGAATCAAAA CTTTCAACAA CGGATCTCTT GGTTCTGGCA  200

TCGATGAAGA ACGCAGCGAA ATGCGATAAG TAATGTGAAT TGCAGAATTC  250

AGTGAATCAT CGAATCTTTG AACGCACATT GCGCCCTCTG GTATTCCGGA  300

GGGCATGCCT GTTCGAGCGT CATTTCAACC CTCAAGCCTG GCTTGGTGAT  350

GGGGCACTGC TTCTTACCCG AGAAGCAGGC CCTGAAATTC AGTGGCGAGC  400

TCGCCAGGAC CCCGAGCGCA GTAGTTAAAC CCTCGCTCTG GAAGGCCCTG  450

GCGGTGCCCT GCCGTTAAAC CCCCAACTTC TGAAAATTGA CCTCGGATCA  500

GTAGGA 506

本发明的有益效果：为没食子酸的工业化生产，为保护环境、保护植物资源，提供一条新途径。