[发明专利]一种抗氧化活性肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗氧化活性肽，本发明还涉及一种该抗氧化活性肽的制备方法。

背景技术

玉米蛋白粉(Corn Gluten Meal缩写CGM)俗称玉米黄粉，是玉米湿法生产淀粉的副产物之一，约含60％的蛋白质，抽样检测其蛋白质组成为玉米醇溶蛋白(zein)占68％、谷蛋白(glutelin)占22％，其余为球蛋白(globulins)和白蛋白(albumin)。玉米蛋白粉是一种资源丰富、成本低廉的天然植物蛋白原料，但就其氨基酸组成而言，由于赖氨酸和色氨酸的含量都不高，所以玉米蛋白是一种非全营养蛋白。另外，玉米蛋白粉所含的蛋白质难溶于水，组成复杂，口感粗糙，因此，无论是在食品领域还是在饲料行业都很少有人予以重视，有些工厂甚至将其与其它副产物一起不加回收就自然排放掉了，这不仅是对粮食资源的一种浪费，同时也对生态环境造成了一定程度的污染。

再者，由于人类生存环境和生活方式、尤其是饮食结构的改变，体内环境也在发生着潜移默化的改变。以基础物质代谢为例，越来越多的过氧化物质和有害自由基正在人们体内源源不断的生成，严重地威胁着人们的健康。对此，绝大多数人都缺少认知。虽然医学专业人员为解决这一问题做了很多的研究，但是目前真正能够起到预防氧化、有效抑制体内自由基形成的高活性抗氧化物质还不很多，这就需要我们相关专业的技术人员进一步做出更多的努力。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是提供一种抗氧化活性肽，由于生产该产品的主要原料是玉米蛋白粉，首先为这种长期被冷落、被遗弃的天然资源提供了一种有效的利用途径，同时还开发出了一种具有防治疾病、抗衰老等功能，可以做为医药、化妆品等产品添加剂使用的抗氧化活性肽。本发明要解决的另一个技术问题是提供一种该抗氧化活性肽的制备方法。

本发明产品抗氧化活性肽的分子量在20,100-31,000之间，N端5个氨基酸序列为：K-V-T-Y-H，抗氧化活力为236.68U/mL。

本发明产品抗氧化活性肽的制备方法：以微生物纳豆芽孢杆菌(Bacillusnatto)为菌种，以玉米蛋白粉为原料，采用液态培养方式，获得具有抗氧化活性的多肽混合物，再通过离子交换层析、凝胶层析、反相色谱逐级收集高活性且分子量＞5,000Da部分，最后通过凝胶电泳获得。

在上述技术方案中所使用的纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)可以采用现有品种，该菌种目前已经很容易得到。本发明最优选的菌种是本课题组于日本传统食品纳豆中分离、筛选得到的，保藏号为CGMCC No.2236的菌株。该菌种最突出的特性就是其分泌蛋白酶的活力较现有菌株至少要高出2.66％。

本发明产品制备的具体方法：

1、发酵液的制备

以纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)为发酵菌种，将1mL种子培养液接入装有初始pH7.0的30mL发酵培养基的250mL三角瓶中，于34℃、200r/min条件下振荡培养32h后5000r/min离心10min，在沸水浴中灭酶活10min，所得液体为抗氧化活性肽的混合物。

2、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换层析

将第一步所得的混合物10000r/min离心15min，取上清液过0.22μm的微孔滤膜，滤液进行弱阴离子交换层析起始缓冲液：25mmol/L pH9.0Tris-HCl，洗脱液：含1mol NaCl的25mmol/L pH 9.0Tris-HCl，流速：1.5mL/min，UV280nm处检测。测定各管收集液的抗氧化活力，收集高活性部分备用。

3、Sephadex G-25凝胶过滤层析

①将DEAE-Sepharose Fast Flow的高活力样品冷冻抽干浓缩后，用洗脱液25mmol/L pH 9.0Tris-HCl溶解后进行凝胶层析脱盐流速2.0mL/min，UV280nm处检测。测定各管收集液的抗氧化活力，收集高活性部分备用。

②将Q-Sepharose HP的高活力样品冷冻抽干浓缩后，用洗脱液双蒸水溶解后10000r/min离心10min，取上清液进行凝胶层析脱盐流速2.0mL/min，UV280nm处检测，测定各管收集液的抗氧化活力，收集高活性且分子量＞5,000Da部分备用。

4、Q-Sepharose HP强阴离子交换层析色谱