[发明专利]一种除硫脱氮自养菌的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种自养菌的筛选方法。

背景技术

生物脱硫工艺因去除率高、无需投加化学药剂、可生成单质硫回收等优点而日益受到关注，其中硫杆菌属(Thiobacillus)是一类具有除硫脱氮功能的微生物，他们可以通过氧化硫化合物获得能量，同时还可以将硝酸盐作为电子受体将其还原为氮气，整个除硫脱氮过程中不需要外加有机碳源，且可通过控制适宜的生态条件，得到最大化的单质硫转化率，实现单质硫的回收，是一类有重要意义的工程菌。

目前，分离除硫脱氮自养菌菌株都是采用平板划线法，但由于除硫脱氮自养菌的生长非常缓慢，时代时间较长，较难在培养基上获得生长好的单菌落，且采用平板划线法时，培养基的存放条件需要保持厌氧条件，这样也使得在分离纯菌的过程变得更加复杂，增加了获得纯培养的难度。

发明内容

本发明目的是为了解决现有分离除硫脱氮自养菌的方法复杂、所得单菌落生长不好的问题，而提供一种除硫脱氮自养菌的筛选方法。

一种除硫脱氮自养菌的筛选方法按以下步骤实现：一、取样品菌悬液接种于除硫脱氮自养菌液体培养基中，在26～30℃、140～180r/min的条件下进行分离扩大培养，培养期为14d；二、取分离扩大培养后的菌悬液接种于固体分离培养基上，浇盖培养基制成厌氧夹层培养基，在26～30℃的条件下恒温培养至培养基夹层中出现气泡；三、挑取气泡内的单菌落，转接于除硫脱氮自养菌液体培养基中，在26～30℃的条件下恒温扩大培养至培养基出现混浊；四、挑取培养基中的菌液接种于固体分离培养基上，在26～30℃的条件下恒温培养至有单菌落长成，然后挑取单菌落转接于除硫脱氮自养菌液体培养基中；五、重复步骤二、三和四至分离出单菌落，即为除硫脱氮自养菌；其中步骤一、三和四中所用除硫脱氮自养菌液体培养基相同，每升除硫脱氮自养菌液体培养基均是由5.0g的Na₂S₂O₃·5H₂O、1.0g的NH₄Cl、2.0g的Na₂HPO₄、0.8g的MgSO₄·7H₂O、3.0g的NaHCO₃、3.5g的KNO₃、0.5mg的EDTA、22.0ug的ZnSO₄、55.0ug的CaCl₂、50.6ug的MnCl₂·4H₂O、11.0ug的(NH₄)₆MoO₂₄·4H₂O、15.7ug的CuSO₄·5H₂O、16.1ug的CoCl₂·6H₂O、1mL的维生素液和余量的蒸馏水组成，除硫脱氮自养菌液体培养基pH值为7.0；步骤二和四中所用固体分离培养基相同，每升除硫脱氮自养菌固体体培养基均是由5.0g的Na₂S₂O₃·5H₂O、1.0g的NH₄Cl、2.0g的Na₂HPO₄、0.8g的MgSO₄·7H₂O、3.0g的NaHCO₃、3.5g的KNO₃、0.5mg的EDTA、22.0ug的ZnSO₄、55.0ug的CaCl₂、50.6ug的MnCl₂·4H₂O、11.0ug的(NH₄)₆MoO₂₄·4H₂O、15.7ug的CuSO₄·5H₂O、16.1ug的CoCl₂·6H₂O、1mL的维生素液、20g的琼脂和余量的蒸馏水组成，除硫脱氮自养菌液体培养基pH值为7.0。